综述：寡核苷酸治疗药物中高阶结构、超分子高阶结构及聚集体的评估与表征策略

本篇综述由欧洲制药寡核苷酸联盟（EPOC）联合撰写，系统探讨了合成寡核苷酸治疗药物中高阶结构（HOS）、超分子高阶结构（sHOS）及聚集体形成的机制与挑战。文章基于行业经验提出科学评估框架，强调通过设计工作流程预判和规避（s）HOS/聚集体对药物开发的影响，填补了该领域技术指南的空白。

　　

Abstract
合成寡核苷酸作为新兴治疗药物，通过特定一级结构基序可形成高阶结构（HOS）、超分子高阶结构（sHOS）或聚集体，其形态受溶解介质和浓度等因素影响。尽管罕见，这些非预期结构可能干扰原料药（DS）或制剂（DP）生产。目前缺乏相关表征指南，本文结合行业实践提出系统性评估策略。

Preamble
欧洲制药寡核苷酸联盟（EPOC）通过跨公司合作，旨在统一寡核苷酸治疗的CMC开发标准。本文是其基于科学共识的技术白皮书之一。

Introduction and Definitions
已批准的20种寡核苷酸药物通过序列特异性发挥作用，化学修饰可优化稳定性与靶向性。本文聚焦其自组装行为——从双链、发卡环到四链体等HOS，以及由此衍生的sHOS和聚集体。

Definitions and Types of (s)HOS
HOS形成依赖序列特异性非共价作用：氢键介导碱基配对，而π-π堆积驱动构象变化。例如反义链通过Watson-Crick配对形成双链，G-四链体则依赖Hoogsteen氢键。化学修饰如2'-O-甲基化会显著改变热稳定性。

Definitions and Types of Aggregates
聚集体分为可见颗粒（>100 μm）和亚可见颗粒（0.1-100 μm），可能引发免疫原性风险。不同于结构明确的sHOS，聚集体通常为无序簇集体，在注射制剂中需严格监控。

Summary and Recommendations
建议采用多学科方法：

1. 早期开发阶段使用圆二色谱（CD）和动态光散射（DLS）监测构象变化
2. 强制降解实验评估环境敏感性
3. 建立基于尺寸排阻色谱（SEC）的聚集体检测标准
   关键是通过可控条件避免不可逆聚集，确保临床批次一致性。

Author Contributions
跨国药企团队（包括强生、百健、阿斯利康等）共同完成，方法论代表行业共识。

Declaration of competing interest
作者声明无利益冲突。

Acknowledgements
致谢EPOC指导委员会的技术审核。