"基于APTES-EDC/NHS共价偶联技术的尿液样本肝吸虫抗原快速检测微孔板开发及其在湄公河流域诊断应用"

本研究针对传统ELISA检测肝吸虫(Opisthorchis viverrini, Ov)抗原耗时长的瓶颈问题，创新性地采用3-氨丙基三乙氧基硅烷(APTES)与1-乙基-(3-二甲基氨基丙基)碳二亚胺盐酸盐/N-羟基琥珀酰亚胺(EDC-NHS)偶联技术，开发了30分钟快速抗体固定方法。该技术使检测限提升15倍至2 ng mL?1，诊断灵敏度达91.36%，为湄公河流域肝吸虫病筛查提供了高效解决方案。

　　

在东南亚湄公河流域，食用生鱼片导致的肝吸虫(Opisthorchis viverrini, Ov)感染已成为重大公共卫生问题。这种寄生虫感染不仅导致胆管炎，更是引发胆管癌(CCA)的主要诱因。传统诊断依赖耗时18小时的ELISA检测，其中抗体固定步骤就占75%时间。面对12亿感染风险人群，孔敬大学研究人员在《Spectrochimica Acta Part A: Molecular and Biomolecular Spectroscopy》发表突破性成果，通过APTES-EDC/NHS共价偶联技术，将检测时间缩短至30分钟，为资源匮乏地区提供了革命性诊断工具。

关键技术包括：1) 采用KOH-APTES对微孔板表面改性；2) EDC/NHS激活单抗羧基实现定向固定；3) 优化BSA封闭条件；4) 使用现场采集的尿液样本验证性能。

【结果与讨论】

1. 抗体固定优化：0.5% KOH和2% APTES处理微孔板后，30分钟即可完成mAb固定，较传统方法提速36倍。
2. 检测性能：线性范围0.98-31.25 ng mL^?1，LOD达2 ng mL^?1，较常规方法灵敏度提升15倍。
3. 临床验证：在泰国乌达叻府现场试验中显示91.36%灵敏度和80.36%特异性，准确率84.44%。
4. 稳定性：4℃储存28天后信号保留率>90%，满足偏远地区使用需求。

【结论】
该研究开创性地将硅烷化与碳二亚胺化学相结合，解决了ELISA核心耗时瓶颈。Ready-to-use微孔板技术使检测流程简化60%，为肝吸虫病大规模筛查提供了符合ASSURED（可负担、灵敏、特异、便捷、快速、设备简易、可交付）原则的创新方案。特别值得关注的是，该方法在胆管癌高发区实现了"从实验室到田间"的技术转化，通过尿液无创检测为早期诊断开辟了新途径。研究团队特别指出，该平台技术可拓展至其他寄生虫病诊断领域，具有广阔的应用前景。