新型重组嵌合蛋白CHIMISA在皮肤和内脏利什曼病血清及尿液ELISA诊断中的初步研究

针对利什曼病诊断中传统抗原灵敏度低、特异性不足的问题，研究人员开发了基于免疫蛋白组学筛选的嵌合蛋白CHIMISA，通过ELISA技术检测血清和尿液样本。结果显示，CHIMISA对内脏利什曼病(VL)、皮肤利什曼病(TL)及VL/HIV共感染的诊断灵敏度达99-100%，特异性超98%，AUC值接近1.0，显著优于传统SLA抗原，为资源匮乏地区提供了无创诊断新策略。

　　

利什曼病作为一种被忽视的热带病，每年导致全球近百万人感染，其中内脏型(VL)致死率高，皮肤型(TL)致畸风险大。然而现有诊断方法面临巨大挑战：传统可溶性利什曼抗原(SLA)检测在VL/HIV共感染患者中灵敏度骤降，而皮肤病变患者血清抗体水平低导致假阴性频发。更棘手的是，结核、麻风等疾病会产生交叉反应，使得特异性难以保障。这些缺陷严重阻碍了贫困地区的早期干预，亟需开发高精度诊断工具。

来自中国的研究团队另辟蹊径，利用前期免疫蛋白组学筛选的16个抗原蛋白，从中精选SUZ41772.1等4种蛋白的B细胞表位，通过基因工程构建出全新嵌合蛋白CHIMISA。这种"多抗原鸡尾酒"式设计，既保留了各蛋白的优势表位，又规避了全蛋白中的干扰区域。研究采用配对血清和尿液样本进行双盲验证，队列包含VL、TL、VL/HIV患者及健康对照，同时纳入结核、麻风等易混淆疾病样本以评估特异性。

关键技术包括：1）基于免疫蛋白组学筛选抗原表位；2）多表位嵌合基因的合成与重组蛋白表达；3）以L. (L.) infantum和L. (V.) braziliensis的SLA为对照抗原；4）建立血清/尿液双样本ELISA检测体系。

【Construction and characterization of the CHIMISA protein】
研究团队从16个候选蛋白中锁定4个最具诊断潜力的抗原：SUZ41772.1的ERRRSMNSDARERSNSPD表位、SUZ41881.1的QRSMYASHSRRRSQLRTERD表位等，通过柔性连接肽串联构建嵌合基因。生物信息学分析显示，CHIMISA理论分子量约32 kDa，等电点8.7，二级结构以α螺旋为主。Western blot证实该蛋白可被患者血清特异性识别。

【Parasites and preparation of the Soluble Leishmania Antigenic Extract (SLA)】
为横向比较性能，制备了L. (L.) infantum和L. (V.) braziliensis的SLA抗原。值得注意的是，这两种传统抗原在VL诊断中灵敏度仅44-72%，且对TL检测效果更差，凸显了CHIMISA的技术优势。

【诊断效能验证】
血清CHIMISA-ELISA展现出近乎完美的诊断性能：对VL、TL及VL/HIV的灵敏度达100%，特异性98.5%，AUC=1.0。尤为关键的是，在结核、麻风等交叉反应样本中仍保持98%以上的特异性。而尿液检测同样惊艳，灵敏度99%、特异性98.1%，AUC 0.99，为无创诊断提供可能。相比之下，L. infantum SLA的尿液检测灵敏度暴跌至51.1%。

【Discussion】
该研究突破性地解决了三大临床痛点：首先，多表位嵌合设计克服了单一抗原的局限性；其次，尿液检测性能媲美血清，极大简化采样流程；最后，在HIV共感染患者中仍保持高灵敏度，填补了现有试剂的技术空白。作者特别指出，CHIMISA所含表位均来自免疫优势区域，且去除了非特异性序列，这种"精准裁剪"策略值得推广。

这项发表于《Experimental Parasitology》的研究，不仅提供了首个可同时诊断VL/TL/VL-HIV的通用型抗原，更开创了利什曼病无创检测的新纪元。尤其对巴西、印度等流行区而言，这种成本低廉、操作简便的尿液检测方法，或将改写偏远地区的疾病防控格局。未来研究需扩大样本量验证，并探索该蛋白在快速检测试纸条中的应用潜力。