鲤鱼春季病毒血症病毒糖蛋白与宿主互作蛋白的筛选鉴定及CCTα分子机制研究

本研究针对鲤鱼春季病毒血症病毒(SVCV)防控难题，通过酵母膜双杂交技术筛选出15种与病毒糖蛋白(G)互作的宿主蛋白，重点解析了分子伴侣CCTα与G蛋白通过TYR91/GLN94/TYR95位点结合的分子机制，发现CCTα过表达可促进病毒复制，为抗SVCV药物开发提供了新靶点。

　　

鲤鱼春季病毒血症(SVC)是由SVCV引起的急性出血性传染病，被世界动物卫生组织(OIE)列为须通报疾病，我国农业农村部将其归为二类动物疫病。该病毒主要感染鲤科鱼类，传播途径广、致死率高，幼鱼死亡率可达90%以上，给水产养殖业造成巨大经济损失。目前尚无商业化疫苗或特效药物，防控形势严峻。SVCV的糖蛋白(G)作为病毒表面唯一糖基化蛋白，在病毒入侵、组装和释放过程中起关键作用，但对其与宿主蛋白的互作机制知之甚少。

为破解这一难题，福建农林大学的研究团队通过酵母膜双杂交技术筛选与SVCV G蛋白互作的宿主蛋白，结合分子对接和定点突变技术解析关键结合位点，并探究其对病毒复制的影响。研究成果发表在《Fish》期刊，为抗SVCV药物设计提供了理论依据。

研究采用酵母双杂交(Y2H)筛选 zebrafish胚胎文库，通过分子对接预测结合位点，利用定点突变验证关键氨基酸，最后在ZF4细胞系中进行功能验证。主要技术路线包括：构建pBT3-N-G诱饵载体并验证其无自激活效应；筛选互作蛋白后进行一对一Y2H验证；采用SwissDock进行分子动力学模拟；通过qPCR检测病毒基因表达水平。

宿主蛋白与病毒糖蛋白的互作鉴定
通过Y2H系统从zebrafish文库中筛选出15种与SVCV G蛋白互作的宿主蛋白，包括分子伴侣CCTα、胶质纤维酸性蛋白(GFAP)、β-肌动蛋白(ACTB₂)、核糖体蛋白(RPL24/RPS3)等。GO注释分析显示这些蛋白主要参与结合功能、分子功能调控和转录调控，涉及翻译、折叠和运输等生物学过程。

G-CCTα互作机制解析
分子对接显示G蛋白ARG⁸⁹～HIS⁹⁸区域与CCTα形成氢键和疏水相互作用。定点突变证实TYR⁹¹、GLN⁹⁴和TYR⁹⁵是结合关键位点。这些残基的突变显著削弱了G-CCTα相互作用，提示该区域可能是药物设计的靶向位点。

CCTα对病毒复制的影响
在SVCV感染的ZF4细胞中过表达CCTα可显著提升病毒G蛋白基因表达水平，表明CCTα通过直接结合G蛋白促进病毒复制。这一发现为解释SVCV利用宿主分子伴侣系统完成生命周期的机制提供了实验证据。

该研究首次系统鉴定了SVCV G蛋白的宿主互作组，阐明了CCTα作为病毒复制关键辅助因子的分子机制。CCTα与G蛋白的特异性结合位点（TYR⁹¹/GLN⁹⁴/TYR⁹⁵）的发现，为开发靶向G-CCTα相互作用的小分子抑制剂提供了精确靶标。考虑到CCT在真核生物中的保守性，这一发现可能对其他鱼类病毒防控具有借鉴意义。研究不仅丰富了鱼类病毒-宿主互作的理论体系，也为实现"大食物观"下的水产养殖业可持续发展提供了科技支撑。