综述：当前用于检测樟疫霉的方法综述

这篇综述系统回顾了2011-2025年间樟疫霉（Phytophthora cinnamomi）的检测方法，涵盖环境采样（土壤/根系/植物组织）、诱饵法（baiting）、培养分离（PARP/V8A等培养基）和分子鉴定（ITS/PCR）三大流程，并提出了基于实验室资源与时间的决策流程图，为防控这种毁灭性植物病原体提供方法论指导。

　　

引言

樟疫霉（Phytophthora cinnamomi）作为卵菌纲的植物病原体，可引发根系腐烂和茎干溃疡，导致近5000种植物死亡。其复杂的生命周期（包括厚垣孢子、卵孢子和游动孢子）和人类活动传播途径，使其成为农业、林业和生态系统的重大威胁。目前尚无根除方法，因此精准检测成为管理策略的核心。

方法

通过Scopus和Web of Science检索2011-2025年文献，筛选出61篇核心论文及128篇方法学参考文献，系统分析采样策略（直接/间接）、实验室诱饵、培养分离和分子确认流程。

环境采样

直接采样：

• 土壤：46项研究采集300-4000g样本，深度达300mm，通过筛分去除杂质后冷冻或直接分析。
• 根系：27项研究采用表面灭菌（70%乙醇或1%次氯酸钠）后切割成1-10mm片段，直接培养或DNA提取。
• 植物组织：28项研究针对坏死叶片/茎干，灭菌后接种选择性培养基（如PARPH-V8）。

间接诱饵法：

• 使用羽扇豆（Lupinus angustifolius）或杜鹃叶片作为诱饵，土壤与水按1:3比例混合，20-25°C下孵育3-14天，促进游动孢子感染诱饵。

实验室检测

培养分离：

• 培养基：V8汁琼脂（26项）、PDA（27项）和CMA（16项）最常用，添加抗生素（如Pimaricin₅ARPNH）抑制杂菌。
• 形态鉴定：菌落呈花瓣状（PDA）或无纹（V8A），显微镜下可见无乳突的孢子囊（40-70μm）和厚垣孢子。

分子确认：

• ITS区域扩增（60项研究）为主，辅以COX-1/NAD9基因分析。快速RPA-LFD技术将检测时间缩短至2小时。

决策流程

根据资源与目的选择路径：

1. 快速筛查：直接分子检测（1-2天，但假阴性风险高）；
2. 高灵敏度：土壤诱饵+培养（6-24天，可分离活体病原）；
3. 综合确认：培养后ITS测序（金标准）。

挑战与展望

当前局限包括：

• 土壤异质性导致的假阴性；
• 形态鉴定需专业训练；
• 分子检测成本高昂。
  未来可通过高通量测序（HTS）和等温扩增技术提升效率。

结论

多方法联用（如诱饵法+PARP培养基+ITS-PCR）能显著提升樟疫霉检测可靠性，为全球生态保护和农业管理提供关键技术支持。