小菜蛾PxylPBAN的克隆、原核表达及其RNAi对保幼激素和性信息素通路基因表达的影响

　　

摘要： 【目的】通过对小菜蛾Plutella xylostella性信息素生物合成激活神经肽基因PxylPBAN进行克隆、原核表达，并检测RNAi沉默PxylPBAN对小菜蛾保幼激素通路和性信息素合成通路基因表达的影响，探讨PxylPBAN在性信息素合成中的作用。【方法】利用RT-PCR克隆小菜蛾PxylPBAN的CDS全长序列；原核表达PxylPBAN并纯化；通过将dsPxylPBAN注射进小菜蛾雌蛹，利用RNAi沉默PxylPBAN，并利用RT-qPCR验证RNAi后24, 48和72 h时PxylPBAN以及保幼激素通路基因(PxylJHAMT, PxylnJHBP, PxylhJHBP和PxylMet)和性信息素合成通路基因(PxylACC和PxylFAR6)的表达量。【结果】克隆得到小菜蛾PxylPBAN(GenBank登录号：LOC105391112)，全长CDS 582 bp，编码193个氨基酸，蛋白预测分子量约为21.85 kD；原核表达获得PxylPBAN重组蛋白。RNAi结果表明与注射dsEGFP的对照比较，注射dsPxylPBAN后小菜蛾PxylPBAN的表达量显著下调，且注射后24 h时下调最显著；此外，PxylJHAMT, PxylnJHBP, PxylhJHBP, PxylMet, PxylACC和PxylFAR6的表达量也显著下调。【结论】本研究成功获得PxylPBAN重组蛋白，发现PxylPBAN是小菜蛾保幼激素通路和性信息素合成通路的重要枢纽基因，为揭示小菜蛾PxylPBAN与保幼激素对性信息素生物合成的联动调控模式奠定理论基础。