高灵敏度实时环介导等温扩增技术(LAMP)实现柑橘叶片及木虱载体中亚洲黄龙病菌(Ca. L. asiaticus)的快速田间检测

为解决亚洲柑橘木虱(Diaphorina citri)传播的黄龙病(HLB)在巴基斯坦快速蔓延的问题，研究人员开发了一种基于粗提DNA的实时LAMP检测技术。该技术灵敏度较qPCR提升100倍，可在20分钟内完成柑橘叶脉和木虱样本中Candidatus Liberibacter asiaticus的检测，为田间大规模筛查和疫情控制提供了高效工具。

　　

亚洲柑橘木虱(Diaphorina citri Kuwayama)作为黄龙病(huanglongbing, HLB)的传播媒介，其携带的病原体——亚洲候选 liberibacter(Candidatus Liberibacter asiaticus)已在巴基斯坦柑橘产区肆虐。为建立快速田间检测方案，研究者突破性优化了实时环介导等温扩增(loop-mediated isothermal amplification, LAMP)技术，直接利用柑橘叶脉和木虱粗提DNA进行检测。

该技术靶向噬菌体相关序列和16S核糖体DNA(16S rDNA)等高度保守区域，灵敏度达到定量PCR(qPCR)的100倍，仅需20分钟即可完成检测。通过智能便携式设备(Smart-DART)配合安卓系统实时监测荧光信号，结合电泳和常规PCR验证，成功在5-10只木虱或单根叶脉样本中检出病原体。有趣的是，植物粗提DNA产生的电泳条带较木虱样本更为微弱，暗示植物组织中病原体载量差异。

这项技术的田间应用将革新HLB流行病学研究范式——通过大规模筛查木虱种群动态，精准解析Ca. L. asiaticus传播规律，为巴基斯坦柑橘产业的早期疫情预警提供关键技术支撑。