表观遗传调控通过激活NKG2D配体和CCL3增强自然杀伤细胞对膀胱尿路上皮癌的免疫杀伤作用

本研究针对膀胱尿路上皮癌(UC)免疫逃逸难题，发现抗组胺药赛庚啶(CPH)和组蛋白去乙酰化酶抑制剂恩替诺特(ENT)通过表观遗传调控激活NKG2D配体ULBP2和趋化因子CCL3表达，显著增强自然杀伤(NK)细胞对肿瘤细胞的杀伤作用及肿瘤微环境浸润，为UC免疫治疗提供新策略。

　　

膀胱癌是全球泌尿系统最常见的恶性肿瘤之一，其中尿路上皮癌(UC)因其高复发率和治疗抵抗性成为临床难题。尽管免疫检查点抑制剂为部分患者带来希望，但肿瘤微环境的免疫抑制特性导致多数患者响应有限。自然杀伤(NK)细胞作为先天免疫系统的"第一反应者"，本应识别并清除恶性细胞，但狡猾的肿瘤细胞通过下调NK细胞活化受体NKG2D的配体(NKG2DL)等机制实现免疫逃逸。更棘手的是，肿瘤还通过抑制趋化因子分泌阻碍免疫细胞浸润，形成"冷肿瘤"微环境。如何破解肿瘤的免疫逃逸机制，重振NK细胞的抗癌战斗力，成为研究者们亟待解决的课题。

国立中正大学生物医学科学系Michael W.Y. Chan团队与嘉义基督教医院合作，在《Molecular Medicine》发表突破性研究。研究人员创新性地发现抗过敏药物赛庚啶(CPH)与表观遗传药物恩替诺特(ENT)能通过重塑肿瘤表观基因组，双重激活NK细胞杀伤机制：一方面解除NKG2D配体ULBP2的表观沉默，另一方面上调趋化因子CCL3表达，形成"吸引NK细胞-增强识别杀伤"的协同效应，为UC免疫治疗开辟新途径。

研究采用多组学技术路线：通过RNA测序筛选CPH调控的免疫相关通路；利用染色质免疫沉淀(ChIP-qPCR)分析组蛋白修饰(H3K27ac/H3K27me3)变化；建立CRISPR基因编辑的NKG2D过表达NK-92细胞系；采用Calcein-AM荧光标记法进行体外细胞毒性实验；构建MB49小鼠同源移植瘤模型评估体内疗效；通过流式细胞术和免疫组化分析肿瘤浸润淋巴细胞；结合ELISA检测趋化因子分泌水平。研究使用人源UC细胞系(UMUC3、J82、BFTC905)和原代NK细胞，所有实验均设重复并经过统计学验证。

"表观遗传药物增强NK细胞毒性"部分揭示：RNA-seq分析显示CPH处理显著上调BFTC905细胞中ULBP家族基因表达。体外共培养实验证明，经CPH或ENT预处理的UC细胞对NK-92细胞杀伤更敏感，尤其在CRISPR编辑的NKG2D过表达NK细胞中效果更显著(E:T=5:1时杀伤率提升2-3倍，p<0.0001)。原代NK细胞实验验证了这一现象，CD56⁺CD3^- NK细胞对药物处理后的UC细胞杀伤效率提升40-50%。

"ULBP2表达恢复机制"部分阐明：qPCR证实UC细胞中ULBP2表达显著低于正常尿路上皮细胞SV-HUC1(p<0.01)。CPH/ENT处理通过增加ULBP2启动子区活性标记H3K27ac富集(提升3-5倍)，同时减少抑制性标记H3K27me3(降低60-70%)，解除表观沉默。过表达ULBP2使UC细胞对NK细胞杀伤敏感性提升80%，而shRNA敲降则削弱药物效应，证实ULBP2-NKG2D轴的关键作用。

"体内抗肿瘤效应"部分展示：小鼠模型中CPH(5mg/kg)和ENT(3mg/kg)治疗使MB49肿瘤体积缩小50-60%(p<0.05)。流式分析显示肿瘤内NK1.1⁺CD3^- NK细胞浸润增加2-3倍，免疫组化证实NK细胞在药物组肿瘤中呈簇状分布。RNA-seq发现CCL3是人和鼠UC细胞中唯一共同上调的趋化因子，ELISA检测显示其蛋白分泌量增加4-5倍(p<0.01)，解释了NK细胞募集机制。

这项研究创新性地揭示：1)抗组胺药CPH具有表观遗传调节功能，与ENT协同通过"组蛋白修饰重编程"解除肿瘤免疫抑制；2)建立ULBP2-CCL3双轴激活策略，同时增强NK细胞识别与趋化；3)为"老药新用"提供范例，CPH作为已获批药物可加速临床转化。研究不仅为UC治疗提供新方案，其表观遗传-免疫调控机制对其他"冷肿瘤"治疗也有启示意义。未来值得探索CPH与免疫检查点抑制剂的联合疗法，以及在其他NKG2DL沉默肿瘤中的适用性。