COVID-19封锁措施对匈牙利肠道病毒流行及基因多样性的影响评估

本研究针对COVID-19疫情防控措施对肠道病毒(EV)传播的影响展开调查。匈牙利国家公共卫生与药学中心的研究团队通过RT-qPCR检测、病毒分离培养和下一代测序(NGS)技术，分析了2020-2024年间125例EV阳性患者的临床样本。研究发现封锁期间仅检测到柯萨奇病毒A6(CVA6)，而防控措施放宽后出现CVA10、CVA16、埃可病毒E9/E11等多基因型流行，揭示了公共卫生干预对EV传播动态的显著影响，为后疫情时代传染病防控提供重要参考。

　　

在COVID-19大流行期间，全球实施的封锁措施不仅改变了SARS-CoV-2的传播模式，也对其他病原体的流行产生了深远影响。肠道病毒(EV)作为一类具有高度遗传多样性的RNA病毒，通常引起季节性流行，其传播途径包括粪-口传播和呼吸道传播。然而，社交距离、学校关闭等防控措施如何影响EV的流行特征和基因多样性，这些问题尚未得到充分解答。匈牙利作为中欧地区的重要国家，其独特的疫情防控时间线（2020年3月至2021年4月实施分阶段封锁）为研究这一科学问题提供了理想场景。

匈牙利国家公共卫生与药学中心的研究团队在《Virology Journal》发表论文，系统评估了疫情防控措施对匈牙利EV流行的影响。研究团队采用多学科方法，首先通过实时荧光定量逆转录PCR(RT-qPCR)对2020-2024年间2324份临床样本进行筛查，对阳性样本进一步进行病毒分离培养（使用人横纹肌肉瘤RD细胞系）和下一代测序(NGS)分析。研究特别关注了样本来源（包括粪便、脑脊液、皮肤病变组织等）与病毒载量的关系，并通过系统发育分析揭示了病毒株的进化关系。

研究结果显示，EV感染呈现明显季节性特征，夏季和早秋（7-11月）为发病高峰。在严格的封锁期间（2020年5月至2021年4月），EV检出率仅为0.63%，且仅检测到CVA6单一基因型。随着防控措施逐步放宽，EV检出率显著上升至10.66%（p<0.0001），并出现CVA10、CVA16、E9和E11等多个基因型。值得注意的是，2022年出现CVA10集中暴发（7-11月共5例），但随后年份未见继续流行。

在技术方法方面，研究团队建立了完整的分析流程：1）使用QIAamp Viral RNA Mini Kit提取病毒RNA，采用靶向5'UTR的特异性引物进行RT-qPCR检测；2）对Ct值≤37的阳性样本进行RD细胞培养分离；3）通过序列非依赖性单引物扩增(SISPA)结合Illumina MiSeq平台进行全基因组测序；4）使用MEGA X软件构建基于VP1和3Dpol基因的最大似然系统发育树。

临床症状分析显示，EV感染主要表现为发热（72.7%）、手足口病(HFMD，15.2%)和神经系统症状（脑炎/脑膜炎11.1%）。其中神经系统并发症与EVA71、CVA6和E9感染显著相关。年龄分布显示1-5岁儿童占比最高（29.6%），而EV-A物种在成人感染中占主导地位。样本类型分析发现粪便样本不仅阳性率最高（41.76%），而且病毒载量（平均Ct值32.08）显著优于其他样本。

基因进化分析揭示了重要发现：1）CVA6毒株形成两个明显簇群，2024年分离株与法国和印度近期毒株亲缘关系较近，全基因组重组分析确认其为RF-A重组型；2）EVA71毒株分属C1-like亚群，其中2024年分离株与俄罗斯脑膜脑炎相关毒株高度同源；3）CVB5毒株与泰国和意大利流行株聚类，而E6毒株则与法国近期毒株相似。这些发现为理解EV在欧洲的传播动态提供了重要数据。

研究结论部分强调，COVID-19防控措施造成了EV传播的"瓶颈效应"，导致基因多样性暂时降低。随着防控措施放松，不仅EV检出率回升，而且出现基因型"反弹"现象，特别是EV-B物种在2023-2024年占比显著增加。这些发现具有重要公共卫生意义：首先，证实了非药物干预措施对EV传播的有效性；其次，揭示了疫情防控措施可能改变EV的流行模式；最后，建立的基因监测体系为未来疫情预警提供了技术支撑。

该研究的创新性在于首次系统评估了中欧地区COVID-19防控措施对EV流行的影响，并提供了详实的基因进化证据。局限性包括封锁期间样本量较少可能影响统计效力，以及未能获取防控前基线数据进行直接比较。未来研究需要扩大监测网络，以更全面评估EV基因多样性变化对疾病严重程度的影响，为制定针对性防控策略提供科学依据。