新型平板读数器为基础的抗体依赖性增强（ADE）检测方法在正黄病毒感染研究中的应用

为克服传统抗体依赖性增强（ADE）检测方法（如流式细胞术）操作复杂、成本高、耗时长等问题，研究人员开发了基于增强型绿色荧光蛋白（EGFP）表达的单轮感染颗粒（SRIPs）的平板读数器检测法。该研究通过对比流式细胞术与新型检测法对4G2和4E11单抗的ADE活性评估，证实两者高度相关（R2>0.9），为黄病毒感染中疫苗或感染诱导抗体的ADE效应提供了高通量、低成本的分析工具。

　　

背景与问题
登革热病毒（DENV）等正黄病毒（Orthoflavivirus）感染每年导致全球数亿人患病，其中抗体依赖性增强（ADE）现象是引发重症的关键机制。当非中和抗体通过Fcγ受体促进病毒进入细胞时，可能加剧二次感染。传统ADE检测依赖流式细胞术，需病毒固定、免疫染色等繁琐步骤，成本高且耗时长。尽管已有研究尝试用荧光蛋白标记的单轮感染颗粒（SRIPs）简化流程，但流式分析仍制约通量。如何开发更高效、安全的ADE检测技术成为迫切需求。

研究设计与方法
日本研究团队提出了一种基于增强型绿色荧光蛋白（EGFP）表达SRIPs的平板读数器检测法。通过对比传统流式细胞术（使用活病毒）与新型方法对两种单抗（4G2和4E11）的ADE活性评估，验证其可靠性。实验采用K562细胞系（Fcγ受体高表达），利用HEK293T细胞生产SRIPs，并通过荧光强度量化感染效率。

关键技术

1. SRIPs构建：在HEK293T细胞中包装缺失结构蛋白的DENV2 replicon，携带EGFP报告基因；
2. 双平台对比：同步进行流式细胞术和平板读数器检测，分析荧光信号相关性；
3. 高通量优化：省略免疫染色步骤，直接通过96孔板读取EGFP信号。

研究结果

简化流程与高效检测
新型方法将传统流式检测的6小时分析时间缩短至1小时，且无需昂贵抗体标记。通过EGFP-SRIPs感染K562细胞，平板读数器可直接捕获荧光信号，与流式结果高度一致（4G2单抗R2=0.92，4E11单抗R2=0.94）。

安全性与成本优势
SRIPs缺乏结构蛋白，无法产生子代病毒，降低生物安全风险；单次实验成本仅为流式检测的1/5。

讨论与意义
该研究首次将平板读数器与EGFP-SRIPs结合，解决了传统ADE检测的通量瓶颈。其高相关性验证了该方法在评估疫苗或感染诱导抗体ADE风险中的可靠性，尤其适用于大规模筛查。未来可扩展至寨卡病毒（ZIKV）等其他正黄病毒研究，为疫苗研发和临床抗体评价提供标准化工具。

结论
日本团队开发的平板读数器-EGFP-SRIPs系统是一种安全、经济、高通量的ADE检测方法，为黄病毒感染机制研究和疫苗开发提供了重要技术支撑。