基于HybridSPE-PPT结合LC-MS/MS技术的血浆丙戊酸快速检测方法开发及其在中毒病例中的应用

本研究针对丙戊酸（VPA）中毒病例的快速诊断需求，开发了一种结合HybridSPE-PPT（混合固相萃取-蛋白沉淀）与LC-MS/MS（液相色谱-串联质谱）的血浆VPA检测方法。该方法仅需100 μL血浆样本，4分钟完成色谱分析，线性范围20–500 μg/mL（r2>0.999），精密度CV%<9%，回收率>90%，成功应用于13例疑似中毒病例检测。其高效、精准的特性为临床毒理学应急诊断提供了可靠工具。

　　

研究背景与意义
丙戊酸（Valproic acid, VPA）作为治疗癫痫、双相障碍和偏头痛的一线药物，其过量使用可能导致昏迷、肝肾损伤甚至死亡。随着中毒病例增加（美国中毒病例占抗惊厥药物的11%，巴西高达40%），传统免疫分析法因交叉反应等问题难以满足精准检测需求。而现有色谱技术如GC-MS需复杂衍生化步骤，LC-MS/MS虽灵敏但受磷脂干扰显著。如何快速、精准检测血浆VPA浓度，成为临床毒理学亟待解决的难题。

研究方法与技术
巴西研究人员开发了基于HybridSPE-PPT（通过锆涂覆硅胶颗粒同步去除蛋白质和磷脂）的样本前处理技术，结合LC-MS/MS建立检测方法。采用100 μL血浆样本，以5-(对甲基苯基)-5-苯乙内酰脲（MPPH）为内标，4分钟完成色谱分离，质谱采用多反应监测模式（MRM）。方法验证遵循ANSI/ASB Standard 036指南，并应用于13例来自南里奥格兰德州的中毒病例血浆检测。

研究结果

1. 方法学验证：

   • 线性范围20–500 μg/mL（r²>0.999），定量下限20 μg/mL
   • 批内/批间精密度CV%<9%，偏差
   • 基质效应113.3–128.5%，回收率>90%

2. 实际应用：
   中毒病例检测浓度跨度大（21.1 μg/mL至>500 μg/mL），覆盖治疗窗（50–100 μg/mL）与中毒浓度

结论与意义
该研究首次将HybridSPE-PPT技术应用于VPA检测，通过Lewis酸碱作用同步清除磷脂和蛋白质，显著降低基质效应。4分钟超快分析速度使其成为急诊毒理学的高效工具，尤其适合巴西等中毒高发地区的临床需求。相比传统免疫分析法，该方法特异性更高，可避免多药联用患者的假阳性风险。未来可扩展至其他抗癫痫药物的同步检测，为精准医疗提供技术支撑。