调节性树突状细胞通过抑制TLR4/MyD88/NF-κB信号通路改善胶原诱导性关节炎的机制研究

类风湿关节炎（RA）的治疗面临药物副作用大、疗效有限的挑战。贵州医科大学附属医院团队探索了调节性树突状细胞（tolDCs）通过调控TLR4/MyD88/NF-κB通路治疗胶原诱导性关节炎（CIA）的机制。研究发现，tolDCs能显著减轻关节炎症和破坏，抑制滑膜、软骨及骨组织中TLR4/MyD88/NF-κB信号通路的过度激活，为RA的细胞治疗提供新靶点。

　　

类风湿关节炎（Rheumatoid Arthritis, RA）被称为"不死的癌症"，全球约1%人口受其困扰。这种自身免疫性疾病以滑膜增生、慢性炎症和关节破坏为特征，传统治疗依赖非甾体抗炎药（NSAIDs）和改善病情抗风湿药（DMARDs），但存在胃肠道损伤、骨髓抑制等副作用。更棘手的是，约30%患者对现有治疗反应不佳。近年来，调节性树突状细胞（tolerogenic dendritic cells, tolDCs）因其独特的免疫调节功能成为研究热点——这类细胞能诱导抗原特异性免疫耐受，但具体机制尚未阐明。

贵州医科大学附属医院的研究团队在《Molecular Immunology》发表的研究，首次系统揭示了tolDCs通过调控Toll样受体4（TLR4）/髓样分化因子88（MyD88）/核因子-κB（NF-κB）经典炎症通路治疗胶原诱导性关节炎（collagen-induced arthritis, CIA）的分子机制。研究人员采用白介素-4（IL-4）、粒细胞-巨噬细胞集落刺激因子（GM-CSF）联合NF-κB寡核苷酸诱骗体（NF-κB ODN Decoy）诱导骨髓源性tolDCs，通过流式细胞术证实其高表达树突细胞标志物OX-62（87.6%），而共刺激分子CD80/CD86低表达，符合免疫耐受特征。在CIA大鼠模型中，静脉输注tolDCs后采用苏木精-伊红（H&E）染色、番红O-固绿染色及抗酒石酸酸性磷酸酶（TRAP）染色评估关节损伤，并通过免疫组化（IHC）和免疫荧光（IF）检测踝关节滑膜、软骨和骨组织中TLR4/MyD88/NF-κB通路关键蛋白表达及NF-κB p65核转位情况。

主要技术方法
研究采用8周龄雌性SD大鼠构建CIA模型，通过流式细胞术分析细胞表面标志物，组织学染色（H&E、番红O-固绿、TRAP）评估病理改变，免疫组化检测TLR4/MyD88/NF-κB通路蛋白表达，免疫荧光观察NF-κB p65亚细胞定位。

研究结果

1. tolDCs的表型特征：成功构建低成熟度、高纯度的tolDCs，其形态学表现为突起少、集落形成能力弱，且CD80/CD86表达水平显著低于常规DCs。

2. 关节保护作用：tolDCs治疗组大鼠关节肿胀评分降低57%，组织学显示滑膜炎症浸润减少，软骨蛋白多糖流失缓解，破骨细胞（TRAP⁺细胞）数量下降42%。

3. 信号通路调控：免疫组化显示tolDCs显著抑制踝关节滑膜、软骨和骨组织中TLR4、MyD88及磷酸化NF-κB p65（p-NF-κB p65）表达，免疫荧光证实NF-κB p65核转位减少。

结论与意义
该研究首次阐明tolDCs通过三重调控机制发挥治疗作用：① 抑制TLR4/MyD88/NF-κB通路过度激活，减少肿瘤坏死因子-α（TNF-α）、白介素-1β（IL-1β）等促炎因子释放；② 降低基质金属蛋白酶（MMPs）表达，减轻软骨和骨破坏；③ 维持免疫耐受微环境。这不仅为RA的细胞治疗提供理论依据，更开创了通过表观遗传调控（NF-κB ODN Decoy）定向诱导tolDCs的新策略。团队负责人Jiang Hongmei指出，该发现对开发靶向TLR4通路的生物制剂具有重要指导价值，未来或可联合基因编辑技术提升tolDCs治疗的精准性。