新型G蛋白选择性μ-阿片受体激动剂YZJ-4729及其代谢物M10的人血浆LC-MS/MS定量方法开发与验证

为解决传统μ-阿片受体激动剂（如吗啡）因激活β-arrestin通路导致的呼吸抑制等副作用，上海海雁医药团队开发了新型G蛋白选择性激动剂YZJ-4729。本研究建立了一种快速、灵敏的LC-MS/MS方法，可同步检测人血浆中YZJ-4729及其主要代谢物M10（暴露量>10%原型药），线性范围分别为0.500-500 ng/mL和0.0500-50.0 ng/mL。该方法成功应用于健康受试者I期临床试验，为评估该创新药物的药代动力学特征提供了关键技术支撑。

　　

疼痛治疗领域长期面临一个关键矛盾：传统μ-阿片受体（μ-OR）激动剂如吗啡虽能有效缓解疼痛，但会同时激活β-arrestin通路，导致呼吸抑制、便秘等严重副作用。这一困境催生了新一代G蛋白选择性μ-OR激动剂的研发热潮，这类药物能选择性激活镇痛相关的G蛋白通路，而避免触发β-arrestin介导的不良反应。在这一背景下，YZJ-4729应运而生——临床前研究显示，其镇痛效果与已上市的首个G蛋白选择性激动剂oliceridine相当，但呼吸抑制作用显著弱于吗啡和oliceridine，便秘副作用也明显改善。

为支持YZJ-4729的I期临床试验，来自中南大学湘雅三医院等机构的研究团队开发了一套创新的LC-MS/MS（液相色谱-串联质谱）检测方法。该研究发表于《Journal of Chromatography B》，重点解决了两个核心问题：一是建立同步定量原型药YZJ-4729及其主要代谢物M10的方法（后者在人体内暴露量超过总药物相关暴露量的10%）；二是获取健康受试者静脉给药后的药代动力学数据。

研究方法上，团队采用蛋白质沉淀法处理血浆样本，选用Poroshell 120 EC-C₁₈色谱柱（2.1×50 mm，2.7-μm）进行分离，以5.0 mM NH₄Ac/0.1% FA水溶液-乙腈梯度洗脱。质谱检测采用正离子电喷雾电离（ESI⁺）和多反应监测（MRM）模式，以氘代内标d₆-YZJ-4729进行定量，监测离子对为YZJ-4729（m/z 409.3→244.2）、M10（m/z 425.3→260.2）。方法学验证显示，该方法在0.500-500 ng/mL（YZJ-4729）和0.0500-50.0 ng/mL（M10）范围内线性良好。

方法开发
研究团队通过优化色谱条件和质谱参数，成功将YZJ-4729和M10的LLOQ（定量下限）分别降至0.500 ng/mL和0.0500 ng/mL。特别值得注意的是，由于分析物和内标均含易质子化的仲胺基团，采用ESI⁺模式可显著提高检测灵敏度。

应用结果
在1.5 mg和3 mg剂量组的I期临床试验中，该方法成功揭示了关键药代动力学参数：YZJ-4729的消除半衰期分别为1.83 h和2.00 h，代谢物M10则为2.05 h和2.42 h。数据证实M10的系统暴露量超过原型药的10%，符合FDA对代谢物安全性评估的要求。

结论与意义
该研究建立的LC-MS/MS方法不仅满足了创新药物临床研究的检测需求，更首次系统揭示了YZJ-4729及其活性代谢物在人体内的代谢特征。从临床转化角度看，这些数据为后续剂量优化和安全性评估提供了决定性依据——尤其是证实了M10作为主要代谢物的药代动力学特征，这对评估药物长期安全性至关重要。作者Yufeng Ni等强调，该方法未来还可拓展至其他G蛋白选择性μ-OR激动剂的检测，为开发更安全的镇痛药物提供了标准化研究范式。