临床免疫原性检测中阳性对照抗体的意外挑战：解决方案与普适性建议

本研究揭示了临床抗药抗体(ADA)检测中因鼠源单抗(mAb)与人类抗鼠抗体(HAMA)复合导致的阳性对照(PC)信号异常问题。研究团队通过系统实验证实HAMA干扰机制，提出避免使用鼠源抗独特型(MAID)抗体、采用低HAMA血清或阻断剂等解决方案，为ADA检测标准化提供关键指导。

　　

在生物制药领域，抗药抗体(Anti-drug antibody, ADA)检测是评估重组蛋白 therapeutics 安全性和有效性的重要环节。然而，临床免疫原性检测中常遇到各种干扰问题，其中人类抗鼠抗体(Human anti-mouse antibody, HAMA)引发的假阳性信号尤为棘手。传统认为HAMA主要通过非特异性结合影响检测，但来自Genentech的研究团队在开发抗流感B病毒(anti-FLUB)人源化单抗的ADA检测时，意外发现HAMA与鼠源阳性对照(murine anti-idiotype, MAID)的直接复合会导致信号异常增强，这一新机制此前未见报道。

研究团队采用桥联ELISA(bridging ELISA)技术，通过对比不同来源阳性对照的稳定性实验，发现室温暴露后鼠源MAID信号异常升高194.5%。进一步实验证实，该现象源于HAMA与MAID形成复合物，在检测中产生假性桥联信号。关键证据包括：兔源阳性对照无此现象，添加HAMA阻断剂可消除干扰，且信号增幅与HAMA浓度正相关。

主要技术方法包括：1) 桥联ELISA检测系统构建；2) 阳性对照稳定性实验(4°C/室温比较)；3) 物种特异性干扰分析(鼠/兔抗体对比)；4) HAMA阻断实验；5) 复合物形成机制验证。实验使用临床级anti-FLUB人源化单抗及配套检测试剂，血清样本来自常规供体库。

【RT稳定性实验】显示鼠源MAID阳性对照在室温30分钟和4小时信号分别增加63.3%和194.5%，而兔源对照稳定。

【物种特异性验证】证实仅鼠源抗体出现信号异常，添加5%正常人血清可使信号升高2.4倍。

【HAMA阻断实验】证明阻断剂能完全消除信号异常，支持HAMA-MAID复合物形成假说。

结论部分强调，鼠源MAID抗体不适合作为临床ADA检测的阳性对照，推荐采用兔源抗体或低HAMA血清。该发现为ADA检测标准化提供重要依据：1) 揭示HAMA干扰新机制；2) 提出避免使用鼠源抗体的普适性原则；3) 建议在无法更换抗体时采用HAMA阻断方案。论文发表于《Journal of Immunological Methods》，通讯作者Mauricio Maia指出，这一发现可能解释既往部分ADA检测的异常结果，对生物类似药免疫原性评估具有广泛指导意义。研究团队特别致谢Eric Wakshull和Yuan Song的专业建议，声明所有作者均为Genentech员工及罗氏集团股东，无利益冲突。