"慢病毒基因疗法治疗腺苷脱氨酶2缺乏症(DADA2)的临床前评估：人源化NBSGW小鼠中的植入效率与生物分布研究"

本研究针对腺苷脱氨酶2缺乏症(DADA2)这一罕见遗传病，探索了慢病毒载体(LV)介导的ADA2基因疗法的临床前效果。研究人员通过人源化NBSGW小鼠模型，证实LV-ADA2转导的健康供体和患者来源造血干细胞(HSC)能保持多系分化能力，且未在非造血器官检测到病毒整合。该研究首次在体内证明基因校正可恢复DADA2患者HSC的ADA2酶活性和植入潜力，为临床转化奠定基础。

　　

腺苷脱氨酶2缺乏症(DADA2)是一种由ADA2基因双等位突变引发的罕见疾病，临床表现为系统性自身炎症、血管炎、免疫功能障碍和血液异常。虽然抗TNF治疗能缓解炎症症状，但无法解决骨髓衰竭和免疫缺陷问题；异体造血干细胞移植(HSCT)虽可能治愈，却面临移植物抗宿主病和供体匹配等挑战。这一临床困境催生了基因治疗新思路——通过慢病毒载体修复患者自身造血干细胞，从根源上恢复ADA2酶功能。

来自英国的研究团队在《Gene Therapy》发表了一项突破性研究。他们采用第三代慢病毒载体pCCL，携带密码子优化的ADA2 cDNA，通过EFS启动子驱动表达，在人源化NBSGW小鼠模型中评估了LV-ADA2转导造血干细胞的安全性和有效性。研究团队从健康供体和DADA2患者（基因型ADA2 p.G47W/p.G47W）获取CD34⁺ HSC，通过磁珠分选和LV转导后移植入非辐照处理的NBSGW小鼠，采用流式细胞术、qPCR、组织病理学和酶活性检测等多维度分析方法进行系统评估。

关键技术包括：1）使用NBSGW（NOD.Cg-Kit^W-41JTyr⁺Prkdc^scidIl2rg^tm1Wjl/ThomJ）小鼠模型避免辐照预处理；2）通过MOI 30的LV转导结合LentiBOOST增强剂实现高效基因转移；3）采用CFU-GM/BFU-E/CFU-GEMM集落形成实验评估干细胞潜能；4）建立VCN（载体拷贝数）qPCR检测体系监控生物分布。

移植LV-ADA2转导的健康供体HSC对小鼠体重和组织学无不良影响
通过90天体重监测和组织病理学分析证实，接受转导HSC的小鼠与对照组相比，淋巴器官未出现异常改变，脾脏髓外造血现象正常。

基因修饰HSC保持植入能力和多系分化潜能
流式数据显示，LV-ADA2转导组在骨髓中维持82.2%的人CD45⁺细胞植入率（范围67-87%），与未转导组无统计学差异。CD3⁺ T细胞、CD19⁺ B细胞和CD33⁺髓系细胞在各器官分布均衡，证明基因操作未破坏分化谱系。

载体分布严格限定于造血系统
qPCR检测显示，骨髓中VCN中位数达3.4（范围1.6-4.2），而心脏、脑等非造血器官未检出载体信号，证实靶向特异性。血清检测到2.867 U/L的ADA2酶活性，显著高于对照组。

患者来源HSC经基因校正后功能改善
DADA2患者的转导HSC在移植后显示出增强的植入能力和1.5 U/L的血清酶活性，而未经处理的细胞则完全缺失活性。虽然样本量限制（n=1）需谨慎解读，但这一发现首次在体内证实基因治疗可逆转DADA2的分子缺陷。

这项研究通过严谨的临床前验证，确立了LV介导的ADA2基因治疗策略的双重优势：安全性方面，载体精确靶向造血系统且无组织毒性；有效性方面，成功恢复酶活性并改善患者HSC功能。特别值得注意的是，NBSGW模型的选择颇具匠心——其Kit^W-41突变增强干细胞龛支持，无需辐照预处理即可实现稳定植入，为基因治疗研究提供更接近生理状态的评估平台。

尽管存在动物模型无法完全模拟人类疾病病理的局限性，但该研究为开展首个人体临床试验提供了关键证据链。未来需优化HSC采集方案（尤其对于骨髓衰竭患者），并开展长期随访评估基因表达的稳定性。这项成果不仅为DADA2患者带来治愈希望，其技术路线也为其他单基因造血系统疾病的治疗提供重要参考。