FTA卡在传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)DNA存储与分子检测中的评估与应用

本研究针对虾类养殖中传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)样本存储与运输难题，创新性评估了FTA卡在不同温度(-20°C至37°C)下60天的核酸保存效能。通过优化洗脱方案（FTA纯化试剂结合TE缓冲液）和实时PCR验证，证实FTA卡可在常温稳定保存核酸≥2个月（P>0.05），且对虾组织匀浆的直接检测效果与传统试剂盒相当。该成果为跨境病原监测提供了安全、环保的解决方案，发表于《Journal of Virological Methods》。

　　

在虾类养殖业中，传染性皮下及造血组织坏死病毒(IHHNV)如同一个隐形的经济杀手，自1983年首次在夏威夷的细角滨对虾(Litopenaeus stylirostris)中发现以来，这个仅有3.9 kb单链DNA的微小病毒（属于Parvoviridae科）已造成巨大损失。传统样本运输依赖液氮或70%乙醇保存，但前者成本高昂，后者易燃易泄漏。更棘手的是，偏远养殖区往往缺乏专业实验室支持，使得病原监测成为国际检疫的痛点。

中国水产科学研究院的研究团队独辟蹊径，将医学领域成熟的FTA卡技术引入水产病原检测。这种浸渍特殊化学试剂的滤纸卡片，曾成功应用于HIV、疟原虫等人类病原体存储，但在虾病领域尚未普及。研究人员以世界动物卫生组织(WOAH)列管的IHHNV为模型，通过模拟国际运输场景（-20°C至37°C，60天），结合TaqMan实时定量PCR技术，系统评估了FTA卡的性能。

关键技术包括：1）采用IHHNV阳性虾鳃组织（山东潍坊）与阴性样本（江苏赣榆）建立比对体系；2）优化三步FTA纯化试剂与两步TE缓冲液（200 μL，5分钟/次）的洗脱方案；3）构建灵敏度达1.0×10² copies/μL的标准曲线；4）通过Ct值-SQ线性关系（R²=0.999）验证方法可靠性。

样本来源与核酸提取
比较两种洗脱方法发现，室温下三次FTA试剂洗脱后经两次TE缓冲液处理，膜片空气干燥1小时的方案最优，且组织匀浆直接上样结果与传统试剂盒无统计学差异（P>0.05）。

标准曲线
建立的TaqMan qPCR标准曲线显示极佳线性（R²=0.999），最低检测限达10² copies/μL，为微量样本检测提供保障。

讨论
FTA卡在60天内保持核酸稳定的特性（各温度组P>0.05），解决了乙醇保存的易燃风险。其与常规PCR、实时PCR及LAMP等技术的兼容性，为WSSV、EHP等虾病病原监测提供了新思路。

该研究首次系统验证FTA卡在甲壳类病毒存储中的应用，其"滤纸邮寄"模式可规避生物安全风险，尤其适合"一带一路"沿线国家的跨境检疫。中央公益性科研院所基本科研业务费（2024GH02）和国家虾蟹产业技术体系(CARS-48)的支持，推动该项技术纳入深圳农业专项（项目号1302）进行示范推广。正如通讯作者Bing Yang强调的，这项"绿色诊断"技术将重构水产病原监测网络，为全球食品安全治理提供中国方案。