肿瘤细胞膜仿生纳米胶束协同化疗-免疫治疗三阴性乳腺癌的创新策略

针对三阴性乳腺癌(TNBC)靶向性差、免疫抑制微环境(iTME)等治疗难题，山东第二医科大学团队开发了4T1肿瘤细胞膜仿生纳米胶束(BTZ-LGs@CM+R848-LGs@CM)，通过负载蛋白酶体抑制剂BTZ和TLR7/8激动剂R848，实现协同化疗-免疫治疗。该体系展现显著的同源靶向性，可诱导肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)向M1型复极化、促进树突细胞(DCs)成熟，并在原位和转移模型中抑制肿瘤生长达91.04%，为TNBC精准治疗提供新范式。

　　

研究背景与意义
三阴性乳腺癌(TNBC)因缺乏治疗靶点被称为"最凶险乳腺癌"，其高转移性和免疫抑制微环境(iTME)导致传统疗法效果有限。当前化疗-免疫联合策略面临两大瓶颈：药物难以精准递送至肿瘤部位，以及免疫细胞在iTME中功能受抑——肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)极化为促瘤的M2型，树突细胞(DCs)抗原呈递功能受阻。如何突破这些屏障，成为TNBC治疗的关键科学问题。

山东第二医科大学张博团队创新性地将肿瘤细胞膜伪装技术与纳米药物递送系统结合，构建了4T1肿瘤细胞膜仿生纳米胶束，同时装载化疗药物硼替佐米(BTZ)和免疫调节剂瑞喹莫德(R848)。BTZ通过抑制26S蛋白酶体阻断NF-κB核转位，直接杀伤肿瘤细胞；R848则激活Toll样受体(TLR)7/8，重编程免疫微环境。这种"双管齐下"的策略在《Materials Today Bio》发表的研究中展现出突破性疗效。

关键技术方法
研究采用乙醇注入法制备载药纳米胶束，通过超声破碎获得4T1细胞膜并包裹形成仿生体系。通过透射电镜(TEM)、SDS-PAGE验证载体特性，采用小动物活体成像评估体内靶向性。建立4T1原位瘤、双侧异种移植瘤（4T1/CT-26）和肺转移模型，通过流式细胞术(FCM)、免疫荧光分析TAMs复极化(CD86⁺/CD206⁺)、DCs成熟(CD80⁺CD86⁺)及T细胞浸润(CD4⁺/CD8⁺)，结合ELISA检测细胞因子(TNF-α/IL-10等)。

主要研究结果
3.1 仿生纳米胶束表征
BTZ-LGs@CM粒径73.31±3.15 nm，电位-18.97 mV，电镜显示典型核壳结构。SDS-PAGE证实膜蛋白保留完整，14天内粒径稳定。BTZ和R848包封率分别为77.23%和71.42%，体外释放呈现缓释特性。

3.2 体外细胞摄取
Coumarin 6标记实验显示，4T1细胞对Ce6-LGs@CM的摄取量是普通胶束的1.46倍，流式定量证实膜包裹使荧光强度提升2.0倍，验证同源靶向优势。

3.3 体外抗肿瘤效应
MTT实验表明BTZ-LGs@CM+R848-LGs@CM组细胞存活率最低（P<0.01），划痕实验显示其迁移抑制率达96.44%。Transwell中该组穿膜细胞数较游离药物减少4.7倍。

3.5 巨噬细胞复极化
IL-4诱导的M2型巨噬细胞经BTZ-LGs@CM+R848-LGs@CM处理后，CD86⁺比例升至42.53%（对照组3.56%），同时促炎因子TNF-α分泌增加3.8倍，抑炎因子IL-10下降67%。

3.6 DCs成熟
仿生纳米胶束使DCs成熟标志CD80⁺CD86⁺比例达43.83%，显著高于游离药物组（16.8% vs 7.86%），淋巴结中成熟DCs增加4.7倍。

3.8 体内抗肿瘤效果
在4T1原位瘤模型中，BTZ-LGs@CM+R848-LGs@CM组肿瘤抑制率达91.04%，双侧模型中仅对同源4T1瘤有显著抑制（P<0.001）。肺转移结节数减少87%，H&E显示转移灶面积最小。

3.11 免疫激活分析
肿瘤内CD8⁺ T细胞比例提升4.7倍，脾脏CD4⁺ T细胞增加2.5倍。ELISA显示TNF-α、IFN-γ水平分别升高5.2倍和3.8倍，IL-10降低82%。

结论与展望
该研究首创性构建肿瘤细胞膜仿生纳米共递送系统，通过"膜伪装"突破靶向瓶颈，协同BTZ的细胞毒性和R848的免疫激活功能，实现化疗-免疫治疗的正反馈循环。其创新性体现在三方面：

1. 同源靶向机制：4T1膜表面抗原引导纳米颗粒精准归巢，肿瘤药物浓度提升10.17倍；
2. 免疫微环境重编程：同步实现TAMs向M1型复极化（CD206⁺降至24.16%）和DCs成熟（CD80⁺CD86⁺达43.83%）；
3. 转移抑制效应：通过激活系统性免疫应答，显著减少肺转移结节。

研究仍存在两方面的局限性：一是缺乏血液学指标和肝肾功能的系统评估；二是对BTZ-R848协同机制的分子证据（如p65核转位）需进一步验证。未来可探索该平台在其他实体瘤的应用，并开展GMP转化研究。这项研究为TNBC的精准治疗提供了可转化的新策略，其"仿生递送+免疫调节"的设计思路对肿瘤联合治疗具有普适性启示。