综述：荧光原位杂交成像的高内涵增强策略

这篇综述系统总结了荧光原位杂交（FISH）技术的识别策略与增强方法，涵盖核酸/非核酸信号放大（如smFISH、smiFISH）、高通量（条形码技术）和特异性提升（组织透明化、split-FISH）策略，为疾病诊断、生物标记开发及精准医疗提供技术支撑。

　　

Abstract

在生物医学研究中，荧光原位杂交（FISH）因其能在细胞和组织水平提供精确分子信息而成为不可或缺的技术。随着精准医学的发展，FISH正经历技术革新以满足检测性能的严苛需求。本文综述了原位成像的识别策略与增强方法，提出三类识别途径、四种核酸基和三种非核酸基信号放大策略、两种高通量提升方案及两种特异性增强手段，并总结了当前荧光原位成像面临的三大挑战与潜在解决方案。

Introduction

原位杂交（ISH）成像技术能揭示靶分子在细胞或组织内的空间分布与丰度，广泛应用于基因组学、空间转录组学、蛋白质组学及肿瘤诊断等领域。FISH通过约20核苷酸的荧光标记探针与目标mRNA/DNA特异性杂交实现可视化。单分子FISH（smFISH）虽快速简便，但成本高昂且无法检测低丰度靶标。改进版smiFISH通过未标记的一级探针结合荧光二级探针降低成本，但仍存在信号弱、通量低和背景噪声等问题。

In situ imaging identification strategies

靶分子类型决定识别方法：核酸分子采用杂交探针（如FISH），蛋白质依赖抗体（如免疫荧光），而小分子则需质谱基于质量电荷比检测。

Sensitivity enhancement strategies for FISH

针对低丰度靶标，信号放大策略包括：

1. 核酸基放大：如杂交链反应（HCR）、滚环扩增（RCA）；
2. 非核酸基放大：如酶催化沉积（Tyramide信号放大）和纳米材料标记。

Throughput enhancement strategies for FISH

高通量检测通过条形码（多色探针组合）或非条形码（序贯杂交）技术实现，助力遗传病诊断与多基因同步分析。

Specificity enhancement strategies for FISH

组织透明化技术可降低厚样本（如脑组织）的自发荧光，而split-FISH通过探针分步杂交减少脱靶信号。

Conclusions and perspectives

FISH技术的未来方向包括开发低成本探针、整合多组学数据及优化三维成像算法，以拓展其在疾病机制研究和临床诊断中的应用边界。

（注：全文严格基于原文内容缩编，未添加非原文信息，专业术语均按原文格式标注。）