综述：利用液体活检揭示耐药机制并指导个性化免疫治疗

这篇综述系统阐述了液体活检（Liquid Biopsy）在解析免疫检查点抑制剂（ICIs）耐药机制中的前沿应用，通过追踪循环肿瘤细胞（CTCs）、细胞外囊泡（EVs）和游离核酸（cfNAs）等生物标志物，为个性化免疫治疗策略提供动态监测依据。文章重点探讨了PD-1/PD-L1、CTLA-4等关键靶点的调控机制，并强调人源化小鼠模型在转化研究中的桥梁作用，为克服肿瘤微环境（TME）免疫抑制提供了新思路。

　　

免疫治疗革命与挑战
免疫检查点抑制剂（ICIs）通过阻断PD-1、CTLA-4等免疫刹车蛋白，彻底改变了癌症治疗格局。然而，肿瘤微环境（TME）中复杂的免疫抑制网络——如调节性T细胞（Tregs）、M2型巨噬细胞和髓系来源抑制细胞（MDSCs）的浸润——导致高达70%患者出现原发性或获得性耐药。这种耐药性动态演变的过程，亟需实时监测工具。

液体活检：动态监测的利器
液体活检技术通过血液等体液捕获三类关键标志物：

1. 循环肿瘤细胞（CTCs）：携带原发灶分子特征的"肿瘤信使"，通过血小板包裹和FAS-L介导的T细胞凋亡逃避免疫清除；
2. 细胞外囊泡（EVs）：直径50-1000 nm的脂质囊泡，富含肿瘤特异性RNA（如circUHRF1）和蛋白（如Survivin），在胰腺癌等疾病中分泌量显著升高；
3. 游离核酸（cfNAs）：甲基化CDKN2A/p16^INK4A等表观遗传标志物可早于影像学发现乳腺癌复发。

耐药机制的分子解码
液体活检揭示的耐药途径包括：

• 抗原呈递缺陷：β₂-微球蛋白突变导致MHC-I类分子缺失
• 免疫检查点代偿：PD-L1⁺ EVs通过旁分泌抑制CD8⁺ T细胞
• 干扰素通路失活：JAK1/2突变使肿瘤对IFN-γ信号无应答
  2024年研究显示，结合mRNA新抗原疫苗（如mRNA-4157/V940）可显著提升黑色素瘤患者无复发生存率。

人源化模型的转化价值
NSG小鼠植入CD34⁺造血干细胞后，可重建包含T/B/NK细胞的人类免疫系统。这类模型成功预测了抗PD-1抗体疗效，并验证了双特异性抗体（如PD-1×LAG-3）的协同作用。最新STRIDE方案中，单次tremelimumab（抗CTLA-4）联合durvalumab（抗PD-L1）在肝癌治疗中展现出突破性效果。

未来诊疗一体化路径
通过液体活检动态监测ctDNA突变负荷与EVs免疫调节分子，结合类器官药敏测试，可构建"检测-治疗-再检测"的闭环系统。例如，外泌体circRNA谱可预警NK细胞功能衰竭，而cfDNA片段组学已实现胰腺癌早期诊断。这种策略将传统"一刀切"治疗转变为实时优化的精准医疗模式。

挑战与展望
当前限制包括EVs分离标准化、人源模型免疫重建效率个体差异等。随着微流控芯片和单细胞测序技术进步，液体活检有望在免疫治疗耐药"时间窗"预测中发挥更大价值，最终实现从实验室到临床的完美转化。