高效制备型HPLC优化分离阿育魏实精油中百里香酚及其抗耐药念珠菌活性研究

本研究针对天然产物高纯度分离的技术瓶颈，开发了基于甲醇-水(90:10, v/v)体系的制备型高效液相色谱(Prep-HPLC)新方法，首次从阿育魏实(Trachyspermum ammi)精油中分离获得纯度达98.87%的百里香酚(thymol)，其对抗多重耐药白色念珠菌(C. albicans)和耳念珠菌(C. auris)的最低抑菌浓度(MIC)分别达0.125 μg/mL和0.25 μg/mL，为抗真菌药物研发提供了重要候选分子。

　　

在天然药物研发领域，高纯度活性成分的获取始终是制约其临床应用的关键瓶颈。百里香酚(thymol)作为一种具有广谱抗菌活性的单萜酚类化合物，传统分离方法面临效率低、纯度不足等挑战。尤其值得注意的是，随着多重耐药念珠菌(MDR Candida)感染的全球蔓延，开发新型抗真菌药物迫在眉睫。阿育魏实(Trachyspermum ammi)作为含49%百里香酚的天然资源，其高效分离技术的缺失严重制约了该化合物的开发利用。

针对这一科学问题，某大学的研究团队在《Journal of Chromatography B》发表研究，首次建立从阿育魏实精油中规模化分离百里香酚的制备型高效液相色谱(Prep-HPLC)方法。通过系统优化甲醇-水(90:10, v/v)流动相体系，成功实现目标化合物98.87%的高纯度分离，并证实其对MDR C. albicans和C. auris的显著抑制活性。

关键技术方法包括：采用水蒸气蒸馏法提取阿育魏实种子精油；通过分析型HPLC(甲醇:水=60:40, v/v)建立基础分离条件；升级为半制备色谱系统进行放大优化；联合气相色谱-质谱联用(GC-MS)、傅里叶变换红外光谱(FTIR)、X射线衍射(XRD)和核磁共振(NMR)进行结构确证；通过微量肉汤稀释法测定抗真菌活性。

【Results and discussion】

1. 色谱方法开发：将分析型HPLC条件成功转化为半制备规模，优化后的甲醇-水(90:10)体系在214 nm检测波长下实现基线分离，单次运行可处理200 mg粗提物。
2. 结构表征：GC-MS显示目标峰分子量为150.1 Da，与百里香酚标准品保留时间一致；FTIR证实酚羟基(3420 cm^-1)和芳香环(1610 cm^-1)特征峰；XRD图谱与标准品晶型匹配；¹H NMR显示δ 6.65 (芳香质子)和δ 4.72 (酚羟基)特征信号。
3. 抗真菌活性：对MDR C. albicans的MIC₅₀为0.125 μg/mL，较两性霉素B提升8倍；对MDR C. auris的MIC₅₀为0.25 μg/mL，且时间-杀菌曲线显示浓度依赖性。

【Conclusion】
该研究创立了首个从阿育魏实精油中规模化分离百里香酚的Prep-HPLC标准化流程，突破传统蒸馏法纯度不足的局限。获得的超高纯度产物展现出对抗MDR念珠菌的卓越活性，其MIC值显著低于临床常用抗真菌药。特别值得注意的是，该方法采用可回收的甲醇-水体系，符合绿色化学原则。这项成果不仅为天然抗真菌药物开发提供优质原料，更开创了药用植物高值化利用的新范式，对推动分离科学技术进步具有双重意义。