Eupatilin通过抑制ABCB1逆转黑色素瘤对威罗菲尼耐药性的机制研究

本研究针对黑色素瘤患者对BRAF抑制剂威罗菲尼（vemurafenib）产生获得性耐药的临床难题，通过构建耐药细胞株A375R，发现ABCB1转运体上调是耐药关键驱动因素。研究人员结合RNA测序、定量构效关系模型（QSAR）和ADMETlab 2.0筛选，首次证实FDA已批准药物eupatilin可作为ABCB1特异性抑制剂，在体外和体内实验中显著恢复耐药细胞对威罗菲尼的敏感性。研究还揭示PI3K-AKT-mTOR通路激活导致ABCB1上调的分子机制，为克服靶向治疗耐药提供了新策略。

　　

黑色素瘤作为最具侵袭性的皮肤恶性肿瘤，其BRAF^V600E突变驱动的特性使BRAF抑制剂威罗菲尼（vemurafenib）成为标准治疗手段。然而临床数据显示，超过半数的患者会在6-8个月内出现获得性耐药，这一困境促使科学家们不断探索耐药机制和解决方案。既往研究发现ATP结合盒（ABC）转运蛋白家族可能参与这一过程，但ABCB1在黑色素瘤耐药中的具体作用尚未阐明。

中南大学的研究团队通过逐步剂量递增法构建了威罗菲尼耐药细胞株A375R，其IC₅₀值达到亲本细胞的7.75倍。转录组分析揭示ABCB1在耐药细胞中显著上调，基因敲除实验证实ABCB1是决定耐药表型的关键因素。为寻找临床可快速转化的解决方案，研究人员采用定量构效关系（QSAR）模型和ADMETlab 2.0平台对FDA已批准化合物进行虚拟筛选，意外发现黄酮类化合物eupatilin具有强效ABCB1抑制活性。

关键技术包括：建立耐药细胞模型A375R；RNA测序分析差异表达基因；CCK-8法和克隆形成实验评估药物敏感性；分子对接和ADMET性质预测筛选化合物；小鼠异种移植模型验证联合治疗效果。

ABCB1表达与威罗菲尼耐药相关
耐药细胞A375R中ABCB1 mRNA和蛋白水平分别升高4.2倍和3.8倍。临床样本分析显示ABCB1高表达与患者较短的无进展生存期显著相关（p<0.01）。

eupatilin的ABCB1抑制效应
分子动力学模拟显示eupatilin可稳定结合ABCB1的核苷酸结合域（NBD），抑制其ATP酶活性。在2μM浓度下，eupatilin使A375R对威罗菲尼的敏感性恢复至亲本细胞水平。

PI3K-AKT-mTOR通路的调控作用
磷酸化蛋白芯片发现耐药细胞中AKT（Ser473）和mTOR（Ser2448）磷酸化水平升高。使用LY294002抑制PI3K后，ABCB1表达下降62%，提示该通路参与ABCB1转录调控。

体内外联合治疗效果
在裸鼠移植瘤模型中，eupatilin（50mg/kg）与威罗菲尼联用使肿瘤体积缩小78%，显著优于单药组（p<0.001）。病理检查显示联合组凋亡细胞数量增加5.3倍。

这项研究首次阐明ABCB1介导的威罗菲尼耐药机制，并创新性地将eupatilin重新定位为ABCB1抑制剂。特别值得注意的是，eupatilin作为已获批的胃黏膜保护剂，其安全性数据可加速临床转化进程。研究发现PI3K-AKT-mTOR-ABCB1轴在耐药中的调控作用，为开发新型联合治疗方案提供了理论依据。作者Juan Su和Lixia Lu强调，该策略不仅适用于黑色素瘤，对其它ABCB1过表达的恶性肿瘤同样具有借鉴价值。论文发表在《Journal of Dermatological Science》，为克服靶向治疗耐药这一全球性难题贡献了中国学者的智慧。