乙醇联合乙基肉桂酸酯（ECi）组织透明化技术：成年斑马鱼全脑成像的高分辨率解决方案

【编辑推荐】为解决传统BABB法致癌性强、荧光淬灭及组织收缩等问题，研究人员开发了基于乙醇脱水与ECi的新型组织透明化技术。该技术显著提升了成年斑马鱼全脑TH（酪氨酸羟化酶）标记的荧光稳定性，维持神经元形态30天以上，为神经再生研究提供了安全高效的3D成像方案。

　　

在神经科学研究中，三维可视化技术的突破正逐渐改变人们对复杂脑结构的认知方式。传统二维组织切片虽能揭示细胞层面的细节，却如同试图通过拼凑碎片来还原一座雕塑——耗时费力且难以保留空间信息。尤其对于斑马鱼这类模式生物，其大脑虽小却拥有高度保守的神经结构，是研究神经再生和退行性疾病的理想模型。然而，现有主流透明化试剂BABB（苯甲醇/苯甲酸苄酯）存在明显缺陷：不仅具有致癌风险，还会导致荧光信号衰减和组织收缩，严重制约了长期成像研究。

针对这一技术瓶颈，由Monash大学领衔的国际团队在《Journal of Neuroscience Methods》发表研究，系统比较了BABB、iDISCO和新型ECi（乙基肉桂酸酯）三种透明化方法对成年斑马鱼全脑TH（酪氨酸羟化酶，多巴胺能神经元标记物）成像的影响。研究人员通过优化乙醇脱水结合ECi的透明化流程，成功实现了三大突破：保持组织形态学完整性、延长荧光信号稳定性至30天以上，以及与UltraMicroscope II超微显微镜的完美兼容。

关键技术方法包括：1）成年斑马鱼全脑TH免疫染色（样本来源：Monash大学FishCore设施）；2）乙醇梯度脱水联合ECi透明化处理；3）BABB与iDISCO平行对照实验；4）超微显微镜三维成像与定量分析。

【RESULTS AND DISCUSSION】
组织透明度比较：ECi处理后的脑组织折射率匹配最佳，实现深层结构可视化（图1A(II)），而BABB样本出现明显收缩变形。

荧光稳定性测试：TH信号在ECi组30天后仍保持初始强度的82%，显著高于BABB组的45%（p<0.01）。

细胞计数准确性：ECi维持了98.7±3.2%的TH⁺细胞数量，而BABB导致21.5%的计数偏差（p<0.001）。

【CONCLUSION】
该研究确立的ECi-乙醇联用方案，首次在成年斑马鱼全脑尺度实现了"三高"特性：高分辨率（保留<5 μm的神经突触）、高保真（细胞计数误差<3%）、高耐久（荧光稳定期≥30天）。其非致癌特性更使得该技术适用于常规实验室环境，为神经退行性疾病机制研究和药物筛选提供了革命性工具。作者Kalavathy Ramasamy等特别指出，该方法在帕金森病模型中的应用潜力——通过长期追踪TH⁺神经元动态变化，有望揭示多巴胺能神经元的再生规律。

这项由马来西亚高教部（FRGS/1/2018/STG03/UITM/01/1）和国际脑研究组织（IBRO）共同资助的研究，不仅解决了传统透明化技术的毒性问题，更通过创新的ECi配方，将斑马鱼神经影像学研究推向了新的维度。正如通讯作者Abu Bakar Abdul Majeed强调的："当技术限制被突破，我们终于能看清大脑在三维空间讲述的完整故事。"