新生儿鹅口疮相关酵母菌的毒力特征与分子鉴定研究

本研究针对新生儿鹅口疮的致病机制，通过形态学和分子生物学技术鉴定了79例临床分离株中Candida albicans等11种酵母菌的分布特征，发现51.9%为C. albicans，并首次在埃及报道Trichosporon asahii致病案例。研究证实PLB1和SAP1基因与水解酶活性显著相关，为临床诊疗提供新依据。论文创新性应用(CALB1-CALB2)特异性引物区分C. albicans与C. dubliniensis，发表于《BMC Microbiology》。

　　

新生儿鹅口疮作为常见的口腔黏膜感染，严重威胁着早产儿和低体重儿的健康。尽管已知Candida albicans是主要病原体，但非白色念珠菌的致病机制仍存在认知空白。更棘手的是，传统鉴定方法难以区分形态相似的C. albicans和C. dubliniensis，且水解酶等毒力因子的分子机制尚未阐明。这些知识缺口直接影响临床诊断准确性和治疗策略的制定。

针对这些问题，南谷大学的研究团队开展了一项创新性研究，系统分析了ICU新生儿口腔样本中酵母菌的分布特征和致病机制。研究团队从172例临床样本中分离出79株酵母菌，采用多维度技术揭示了病原谱系和毒力特征。论文发表在《BMC Microbiology》杂志，为新生儿真菌感染的诊疗提供了重要依据。

研究主要运用了以下关键技术：1）基于Chromogenic和HiChrome培养基的形态学鉴定；2）CALB1-CALB2特异性引物PCR区分C. albicans；3）CandF-CandR通用引物PCR结合ITS测序鉴定其他菌种；4）卵黄平板法检测磷脂酶活性；5）酪蛋白水解实验评估蛋白酶活性；6）PLB1和SAP1基因的PCR检测。

【研究结果】

【背景】研究团队首先明确了新生儿鹅口疮的高危因素，发现早产（54例）和低体重（15例）是主要住院原因，这为后续病原分析提供了临床背景。

【材料与方法】通过Sabouraud培养基从172例样本（93男/79女）分离出79株酵母菌，创新性地组合应用三种分子技术：特异性引物PCR（CALB1-CALB2）、通用引物PCR（CandF-CandR）和ITS测序，确保鉴定准确性。

【形态学特征】PCA分析显示，53株菌落呈现典型C. albicans特征（灰色圈），而18株非白色念珠菌表现出颜色变异（黑色圈）。值得注意的是，5株无法通过显色培养基鉴定的菌株，经分子技术确认为罕见病原体。

【分子鉴定】特异性引物PCR显示41株为C. albicans（273bp条带），12株C. dubliniensis需通过810bp条带和测序确认。系统发育分析表明，C. dubliniensis（PP475382等）与C. albicans（KC422432.1）形成独立分支（bootstrap值99%）。

【毒力特征】研究发现36株（45.6%）同时产溶血素、磷脂酶和蛋白酶。特别值得注意的是：

• 溶血素：C. tropicalis（AEMCT72）和K. marxianus（AEMKM78）活性最高（Pz=2.54-2.78）
• 磷脂酶：C. albicans（AEMCA35）和C. glabrata（AEMCGL54）呈中度活性
• 蛋白酶：C. parapsilosis（AEMCP71）表现出最强活性（Pz=3.49）

【基因检测】PLB1基因在64株（81%）中检出，其中45株（57%）同时表现磷脂酶活性。SAP1基因在33株（41.8%）中检出，32株伴有蛋白酶活性。这首次证实了基因型与表型的关联规律。

【讨论与结论】
该研究取得了三个重要突破：首先，建立了CALB1-CALB2/CandF-CandR/ITS测序的三步鉴定体系，成功解决了C. albicans与C. dubliniensis的鉴别难题。其次，首次在埃及发现Trichosporon asahii引起新生儿鹅口疮的案例，扩展了对病原谱的认知。第三，阐明了PLB1/SAP1基因与水解酶活性的相关性，为毒力机制研究提供新靶点。

研究揭示了C. albicans通过SAP1-10基因家族和PLB1/PLB2基因协同作用，产生多种水解酶破坏宿主屏障。特别值得注意的是，非白色念珠菌如C. parapsilosis虽不携带SAP1基因，仍能通过其他SAPs产生强蛋白酶活性，这解释了其临床致病性。

该成果对临床实践具有重要指导意义：一方面，建立的分子鉴定流程可提高诊断准确性；另一方面，PLB1/SAP1可作为毒力标志物，指导重症患者的个体化治疗。未来研究可进一步探索其他SAPs和PLBs基因的功能，为开发新型抗真菌药物提供理论依据。