基于胶体金纳米颗粒的侧向流动免疫层析试纸条快速检测猪塞内卡病毒A非结构蛋白3AB抗体的研究

本研究针对猪塞内卡病毒A（SVA）抗体检测的时效性与现场应用需求，开发了一种基于非结构蛋白3AB的胶体金侧向流动免疫层析（LFI）试纸条。研究通过重组杆状病毒表达系统制备SVA 3AB蛋白，结合胶体金标记技术，实现了15分钟内快速检测。经198份猪血清验证，该试纸条与病毒中和试验（VNA）相比灵敏度达97.97%，特异性为90%（κ=0.892），与间接ELISA结果高度一致（κ=0.880），且无交叉反应性。该技术为猪群SVA感染的现场筛查和疫苗接种监测提供了高效工具。

　　

猪塞内卡病毒A（Senecavirus A, SVA）是一种与猪特发性水疱病（Porcine Idiopathic Vesicular Disease, PIVD）密切相关的病原体，其临床症状与口蹄疫（FMD）等水疱性疾病难以区分，给养殖业造成重大经济损失。目前，SVA的诊断主要依赖实验室技术如病毒中和试验（VNA）和酶联免疫吸附试验（ELISA），但这些方法耗时耗力，难以满足现场快速筛查的需求。更棘手的是，SVA尚无商业化疫苗，而现有疫苗策略中非结构蛋白（Non-Structural Proteins, NSPs）的抗体检测是区分自然感染与疫苗接种的关键。

针对这一难题，朱拉隆功大学的研究团队开发了一种基于SVA非结构蛋白3AB的胶体金侧向流动免疫层析（Lateral Flow Immunochromatographic, LFI）试纸条。该研究通过杆状病毒表达系统重组表达3AB蛋白，将其标记于胶体金纳米颗粒作为示踪物，构建了可在15分钟内完成检测的便携式试纸条。

关键技术包括：（1）利用Bac-to-Bac杆状病毒系统表达重组3AB蛋白，经SDS-PAGE和Western blot验证；（2）胶体金纳米颗粒标记技术；（3）198份猪血清样本的队列验证（含SVA感染组、非感染组及其他病毒交叉反应组）；（4）以VNA和间接ELISA为金标准进行性能评估。

血清样本验证
研究采用30份SVA阳性、25份阴性及10份其他病毒（如FMDV、PEDV）感染血清进行测试。LFI试纸条与VNA的符合率达96.67%（阳性）和92%（阴性），与ELISA的κ值为0.880，显示高度一致性。

特异性分析
试纸条对FMDV、PEDV等常见猪病毒血清均无交叉反应，证实3AB蛋白作为SVA特异性标志物的可靠性。

性能指标
灵敏度达97.97%（VNA对比）和98.62%（ELISA对比），特异性分别为90%和86.79%，显著优于传统方法。

讨论与结论
该研究首次将LFI技术应用于SVA 3AB抗体检测，其快速性（15分钟）与便携性填补了现场诊断空白。通过靶向非结构蛋白，试纸条可有效区分自然感染与未来可能的疫苗接种群体，为SVA防控提供“感染-免疫”双轨监测策略。作者Parin Watcharavongtip和Dachrit Nilubol强调，该技术尤其适合资源有限的养殖场，对东南亚等SVA流行区域的疫情控制具有重要实践意义。论文发表于《Veterinary Microbiology》，为猪病毒诊断领域提供了创新性解决方案。