尺寸排阻色谱-多角度静态光散射联用技术(SEC/MALS)在生物大分子与胶体表征中的研究进展与应用挑战

来自全球的研究人员针对生物大分子与胶体悬浮物的精确表征需求，系统探讨了尺寸排阻色谱耦合多角度静态光散射(SEC/MALS)技术的实验方法学。该研究详细阐述了设备配置、样品制备、数据处理模型及摩尔质量计算方程，揭示了该技术在天然/合成大分子摩尔质量分布测定中的核心优势，为跨实验室可重复性研究提供了标准化框架，同时提出了突破现有检测限的创新路径。

　　

尺寸排阻色谱(SEC)与多角度静态光散射(MALS)的联用技术堪称生物大分子分析的"黄金搭档"。这项技术就像分子世界的精密分拣机，先通过SEC色谱柱将不同尺寸的蛋白质、核酸或胶体颗粒按个头大小排队分离，紧接着MALS检测器立即对每个组分进行全方位的光散射"扫描"。研究人员特别强调，该方法能直接测定10³-10⁸ g/mol范围内的绝对摩尔质量，无需依赖标准参照物——这好比给分子称重时跳过了"砝码校准"步骤。

实验设计中暗藏玄机：样品缓冲液必须经过0.02μm超滤膜严格净化，任何微小的尘埃颗粒都可能变成数据解读中的"捣蛋鬼"。当激光束以18个不同角度同时捕捉散射信号时，德拜图(Debye plot)的斜率会悄悄透露分子的均方根回转半径<>_g²>1/2。有趣的是，对于小于λ/20的小分子，只需简单采用Zimm模型计算，而超大分子则需要动用更复杂的Berry修正公式。

该技术在疫苗开发中大显身手，能精准追踪病毒样颗粒(VLPs)的聚合状态；在生物药品质控环节，可实时监控单抗药物的聚集倾向。不过要注意，当遇到强吸光性样品时，研究人员建议启动"折光指数增量(dn/dc)"校正程序，这个关键参数就像分子的"光学指纹"，不同缓冲环境下可能变化高达15%。展望未来，智能算法与微型化MALS探测器的结合，或将突破现有纳米颗粒检测的灵敏度极限。