靶向CD40共刺激受体增强溶瘤病毒Delta-24-RGD治疗弥漫性中线胶质瘤的疗效

针对儿童弥漫性中线胶质瘤(DMG)缺乏有效疗法的难题，西班牙纳瓦拉大学团队通过联合溶瘤病毒Delta-24-RGD与CD40激动抗体，证实该方案可重塑肿瘤免疫微环境，依赖cDC1细胞诱导长期抗肿瘤免疫，在临床前模型中实现40%完全缓解，为这一致命疾病提供了新型免疫联合治疗策略。

　　

弥漫性中线胶质瘤(DMG)是儿童最常见的致命脑肿瘤之一，患者确诊后平均生存期仅9-12个月。由于肿瘤位于脑干等关键部位，手术切除几乎不可能，而放疗仅能暂时缓解症状。更棘手的是，这类肿瘤具有"免疫荒漠"特征——缺乏浸润性T细胞却富含髓系细胞，使得以T细胞为核心的免疫检查点抑制剂等疗法收效甚微。面对这一临床困境，溶瘤病毒Delta-24-RGD虽在早期临床试验中展现出安全性，但单药疗效仍不足以治愈疾病。

西班牙纳瓦拉大学Marta M. Alonso团队在《Cell Reports Medicine》发表的研究中，创新性地提出通过激活抗原呈递细胞(APCs)的CD40共刺激受体来增强溶瘤病毒疗效的策略。研究人员认为，有效的抗肿瘤T细胞应答依赖于抗原呈递细胞的成熟与功能，而CD40信号通路正是调控这一过程的关键开关。当CD40与其配体CD40L结合时，不仅能增强树突状细胞(DCs)的抗原呈递能力，还能促进巨噬细胞促炎表型转化，从而打破肿瘤免疫抑制微环境。

为验证这一设想，研究团队采用了几项关键技术：通过颅内原位移植建立H3野生型(XFM)和H3K27M突变型(UC-BL6-C7)两种DMG小鼠模型；利用流式细胞术和免疫荧光分析肿瘤微环境中免疫细胞亚群变化；采用Batf3基因敲除鼠验证cDC1细胞的关键作用；结合CSF1R抑制剂PLX3397阐明巨噬细胞/小胶质细胞的功能；通过RNA测序解析全转录组变化特征。

CD40激动剂协同溶瘤病毒显著延长生存期
在H3野生型XFM模型中，单独使用Delta-24-RGD或抗CD40抗体均未显示生存获益，但联合治疗使中位生存期从对照组的14天延长至24.5天，40%小鼠获得完全缓解。这种协同效应具有严格的时间依赖性——延迟3天给予CD40抗体则完全丧失疗效。在H3K27M突变模型中，联合组同样展现出显著生存优势。值得注意的是，治疗未引发明显毒性，小鼠体重保持稳定。

适应性免疫系统是疗效的核心介质
在免疫缺陷Rag2Il2ry^-/-小鼠中，联合治疗完全失效。长期存活小鼠能抵抗肿瘤再攻击，且这种保护作用在阻断淋巴细胞迁出的FTY720处理下依然存在，提示形成了组织驻留免疫记忆。早期分析显示，联合治疗组脾细胞经病毒抗原刺激后产生更多IFNγ，但最终保护作用主要针对肿瘤抗原。

重塑肿瘤免疫微环境景观
治疗6天后，联合组肿瘤中CD45⁺免疫细胞总数增加3倍，其中增殖性(Ki67⁺)CD8⁺和CD4⁺ T细胞显著多于单药组，且表达更高水平的激活标志物(CD137/TIM3/PD1)。髓系 compartment 呈现双相变化：CD40单药主要扩增小胶质细胞，而病毒单药或联合治疗则增加巨噬细胞/单核细胞数量。最具特征性的是，联合组肿瘤中树突状细胞(DCs)比例较对照组增加5倍，且高表达MHC-II、CD40和CD86，呈现成熟表型。

cDC1细胞是疗效的必需执行者
在Batf3^-/-小鼠（缺乏cDC1细胞）中，联合治疗虽初期控制肿瘤生长，但最终未能延长生存。机制研究表明，cDC1具有最强的肿瘤抗原(mCherry⁺)摄取能力，其缺失导致肿瘤引流淋巴结中DC数量减少。体外实验证实，CD40激活与病毒存在协同作用——共处理使cDC1的MHC-II表达提升2倍，并增强其交叉呈递能力，促进CD8⁺ T细胞产生IFNγ和颗粒酶B。

巨噬细胞/小胶质细胞调控DC募集
使用CSF1R抑制剂PLX3397清除巨噬细胞后，联合治疗的生存获益完全消失。深入分析发现，PLX3397不仅减少肿瘤内巨噬细胞，还阻断DC向肿瘤和引流淋巴结的迁移，导致CXCL9/CCL5等趋化因子水平下降。这表明尽管巨噬细胞本身抗原呈递功能有限，但通过分泌细胞因子构建了支持DC募集的生态位。

这项研究首次证实，局部联合CD40激动剂与溶瘤病毒可安全有效地治疗DMG。其创新价值体现在三方面：突破性地将研究焦点从T细胞转向抗原呈递细胞，阐明cDC1是产生持久抗肿瘤免疫的关键介质；揭示巨噬细胞/小胶质细胞通过"接力"作用协助DC功能的级联机制；为临床转化提供明确路径——目前Delta-24-RGD已在DMG患者中完成I期试验，而本研究支持将其与CD40靶向治疗联用。

值得注意的是，该方案采用颅内局部给药，既避免全身毒性，又解决抗体穿透血脑屏障的难题。未来研究需探索最佳给药时序（如放疗后序贯应用）以及人源化抗体的选择。这些发现不仅适用于DMG，也为其他"冷肿瘤"的免疫治疗提供了范式转换——即通过靶向髓系细胞重塑肿瘤微环境，最终唤醒适应性免疫应答。