新型抗真菌药物Olorofim对丹麦3550株霉菌和皮肤癣菌的体外活性研究：EUCAST标准下的四年监测数据

本研究通过EUCAST标准评估新型抗真菌药Olorofim对3550株丹麦临床分离株（2020-2023年）的体外活性，证实其对曲霉属（Aspergillus）、镰刀菌（Fusarium）、赛多孢霉（Scedosporium）等多数霉菌具有稳定高效活性（MIC50 0.03-0.5 mg/L），且不受Cyp51A/Hmg1突变影响。研究首次揭示ISO 20776-1与连续稀释法对MIC测定的显著差异，为临床实验室标准化提供关键依据。

　　

新型抗真菌药物的突破性研究

ABSTRACT
二氢乳清酸脱氢酶（DHODH）抑制剂Olorofim展现出对多数霉菌的强效活性。近期关于其体外获得性耐药和农用杀菌剂交叉耐药的研究提示需要持续监测。本研究采用EUCAST E.Def 9.4和11.0方案，分析了2020-2023年丹麦Statens血清研究所收集的3,550株临床分离株，同时比较了连续稀释与ISO 20776-1标准两种稀释方案的影响。

INTRODUCTION
作为处于III期临床试验（NCT05101187）的新型orotomide类化合物，Olorofim通过靶向真菌特有的II类DHODH酶发挥独特作用机制。其对难治性赛多孢霉和部分镰刀菌的活性尤为突出，但对酵母和毛霉无效。既往研究证实其对包括唑类耐药株在内的多种曲霉有效，但农业杀菌剂ipflufenoquin的上市使得耐药监测更为迫切。

MATERIALS AND METHODS
菌株鉴定采用MALDI-TOF MS和基因测序技术。药敏测试采用含0.1% Tween 20的酵母葡萄糖琼脂制备菌悬液。2020-2022年仅用连续稀释法，2023年引入ISO 20776-1标准。对唑类和Olorofim敏感性降低的菌株进行Cyp51A、Hmg1和PyrE基因测序。使用ECOFFinder程序确定野生型上限（WT-UL）。

RESULTS
稀释方案比较显示，连续稀释法使Olorofim、伏立康唑和艾沙康唑的MIC提高1-2个稀释度。Olorofim对曲霉（Aspergillus）、镰刀菌（Fusarium）、赛多孢霉（Scedosporium）、青霉（Penicillium）等多数菌株的MIC<0.5 mg/L（模态MIC 0.03-0.5 mg/L）。例外情况包括曲霉属Aspergillus section、Fusarium dimerum和Fusarium solani复合体（MIC>1 mg/L）。皮肤癣菌中，除奥杜安小孢子菌（Microsporum audouinii）外，其他菌种的MIC均≤0.06 mg/L。

Serial vs ISO标准20776-1稀释方案
质量控制数据显示，连续稀释法使Olorofim对两种曲霉QC菌株的模态MIC提高1个稀释度。临床分离株测试证实该现象普遍存在，导致WT-UL提高1-2个稀释度。这种现象在泊沙康唑和伏立康唑中也存在，但两性霉素B、艾沙康唑等不受影响。

物种特异性敏感性
曲霉属中，烟曲霉（A. fumigatus）的WT-UL_99.5%为0.06 mg/L（ISO法）或0.125 mg/L（连续稀释法）。土曲霉（A. terreus）的敏感性最高（WT-UL 0.016 mg/L）。值得注意的是，Aspergillus section菌株普遍呈现高MIC（>1 mg/L）。皮肤癣菌中，红色毛癣菌（T. rubrum）的模态MIC为0.016-0.03 mg/L，而奥杜安小孢子菌为0.125 mg/L。

唑类耐药曲霉
165株唑类耐药烟曲霉（含23种Cyp51A突变和7株Hmg1突变）对Olorofim保持敏感。37株土曲霉（含G51A、M217I等突变）同样未显示交叉耐药。在少数MIC升高的菌株中，仅1株携带PyrE Q35L突变（非热点区域突变）。

罕见霉菌
Olorofim对Talaromyces spp.活性最强（MIC≤0.03 mg/L），对拟青霉（Paecilomyces）和青霉（Penicillium）的活性中等（模态MIC 0.125-0.5 mg/L），而对支顶孢霉（Acremonium）和帚霉（Scopulariopsis）活性较差（MIC>1 mg/L）。镰刀菌中，F. fujikuroi复合体最敏感，F. solani和F. dimerum复合体普遍耐药。

时间趋势分析
2020-2023年间烟曲霉对Olorofim的模态MIC保持稳定（0.06 mg/L）。与2016-2019年数据相比，仅黑曲霉复合体（A. niger SC）的模态MIC从0.06升至0.125 mg/L，红色毛癣菌因方法学改变降低2个稀释度。

DISCUSSION
本研究证实Olorofim对多数临床相关霉菌保持广谱高效活性。技术因素特别是稀释方案对MIC测定具有重要影响，建议采用ISO 20776-1标准以确保结果可比性。目前尚未发现临床株携带PyrE热点突变，但需警惕农用DHODH抑制剂可能带来的选择压力。对皮肤癣菌（尤其耐特比萘芬菌株）的优异活性为其拓展临床应用提供依据。期待III期临床试验进一步验证这些体外发现。