脑脊液液体活检技术标准化：BLOODPAC联盟对脑肿瘤患者cfDNA检测前分析变量的共识建议

这篇综述由BLOODPAC脑肿瘤工作组制定，系统梳理了脑脊液(CSF)液体活检中cfDNA检测的关键前分析变量（包括技术、临床和患者因素），提出了22项最低技术要求数据元素(MTDEs)和配套临床参数。通过整合多中心机构操作规范与现有证据，为CSF液体活检的标准化样本采集、处理及数据报告提供权威框架，推动神经肿瘤领域液体活检技术的临床转化与应用。

　　

背景

液体活检通过检测体液中的肿瘤衍生分子实现微创分子分析。尽管血浆细胞游离DNA(cfDNA)已成为实体瘤主流检测靶标，但中枢神经系统(CNS)肿瘤因血脑屏障(BBB)限制导致外周血cfDNA检出率不足。脑脊液(CSF)因其与CNS解剖邻近性及低背景干扰（仅0-5细胞/μL），成为更优选择。BLOODPAC联盟于2022年成立脑肿瘤工作组，旨在建立CSF液体活检标准化前分析变量框架。

BLOODPAC BT工作组

该跨学科工作组审查了6个代表性机构的CSF样本处理协议，结合文献证据（表1列举20项关键研究），将变量分为技术前分析元素（如采集方法）、临床背景（如肿瘤分级）和患者背景（如 demographics）三大类。值得注意的是，CSF每日约600mL的快速周转特性，使其分析窗口期显著短于血液样本。

技术前分析MTDEs

CSF采集方法：腰椎穿刺(LP)、术中（蛛网膜下腔/脑室直接取样）或Ommaya储液囊获取的CSF具有不同分子特征。近期研究显示，肿瘤邻近区域采集的CSF（n=45）比LP-CSF（n=38）具有更高cfDNA浓度和突变检出率。

样本体积与处理：推荐记录精确采集量（0.4-10mL不等），创伤性穿刺导致的血液污染需特别标注。离心条件（如2,000g/4°C）和延迟时间（理想<2小时）显著影响gDNA干扰程度。

保存与运输：Streck管可实现14天室温稳定，而EDTA管需4小时内处理。长期存储建议-80°C分装（0.5-1mL/管），冻融循环需严格记录。

分析方法标准化：输入DNA量（ng级）应明确标注，不同检测平台（如ddPCR需pg级，NGS需5-10倍量）需差异化处理。靶向测序应注明覆盖基因数、测序深度及阳性判定阈值。

临床背景数据元素

肿瘤特征：组织学类型（如胶质瘤/髓母细胞瘤）、分级（WHO 1-4级）及位置（是否接触CSF腔）必须记录。MRI显示肿瘤直接接触CSF采样区域时，cfDNA浓度可提升3倍。

疾病状态：分为初诊未治、治疗后稳定或进展三类。在髓母细胞瘤中，CSF cfDNA水平与肿瘤负荷呈正相关（n=123，低覆盖全基因组测序验证）。

治疗影响：近期手术/放疗/系统治疗（如烷化剂/靶向药）可能改变cfDNA释放动力学。例如DMG患者接受放疗后48小时内CSF中H3K27M突变水平可能短暂升高。

患者背景变量

除常规人口统计学数据外，吸烟史（包年数）和BMI可能影响cfDNA代谢。值得注意的是，儿童患者需特殊考虑采样体积限制（通常<3mL）。

总结与展望

本共识首次系统构建CSF液体活检的全流程标准化体系，其特色在于：

1. 区分"必须"（如采集方法）与"条件性必须"（如离心时间）变量
2. 引入CSF特异性参数（如肿瘤-CSF接触空间关系）
3. 建立与BLOODPAC数据共享平台的强制关联机制

未来方向包括开发CSF模拟质控品、拓展至RNA/蛋白质组分析，以及探索聚焦超声等血脑屏障开放技术对液体活检的增效作用。通过多中心临床验证，这些标准将加速CSF液体活检从研究工具向临床诊断标志物的转化。