高通量RNA提取标准化：改良商业试剂盒提升纯度、产量与效率

为解决核酸提取结果不一致的问题，研究人员通过改良商业试剂盒（增加氯仿/乙醇步骤）优化RNA纯度、产量和提取效率（EE），评估了三种磁珠法试剂盒在六种非人灵长类组织及AAV8载体中的表现。结果显示改良方案显著提升RNA质量，为分子生物学和基因治疗提供标准化参考。

　　

随着RNA和DNA疗法在慢性病治疗及基因治疗领域的快速发展，对高质量核酸提取的需求日益迫切。然而，当前实验室面临一个严峻挑战：商业提取试剂盒的化学差异和缺乏标准化流程导致结果波动，影响下游应用如RT-qPCR（逆转录定量聚合酶链反应）的可靠性。尤其在使用AAV（腺相关病毒）载体时，非封装基因组和质粒DNA污染可能引发假阳性，这一问题在AAV8（血清型8）等热门载体中尤为突出。

为应对这一难题，Lovelace生物医学研究所的Ruwini D. Rajapaksha团队在《Journal of Pharmacological and Toxicological Methods》发表研究，系统评估了三种磁珠法RNA提取试剂盒（Direct-zol?-96MagBead、Maxwell? HT SimplyRNA、HighPrep? Total RNA Plus）在六种NHP（非人灵长类）组织（脑、心、肾、肝、肺、脾）和AAV8样本中的表现。通过引入氯仿/乙醇改良步骤，结合KingFisher? Flex自动化平台和Xeno? IPC（内参RNA）评估，团队建立了可提升提取效率的标准化方案。

关键技术方法
研究采用磁珠法自动化提取技术，通过添加氯仿/乙醇步骤优化裂解液体系，利用UV分光光度计（260:280 nm比值）和IPC回收率评估RNA纯度与EE。针对AAV8样本，额外检测了非封装基因组清除率（≥98%）。

RNA纯度与产量
改良方案使所有试剂盒的260:280比值趋近2.0（表1-3），其中Direct-zol?-96MagBead表现最优（图1-2）。氯仿步骤显著提升纤维组织（如心脏）的RNA产量（表4），可能通过增强裂解液去蛋白能力实现。

提取效率(EE)提升
Xeno? IPC回收率显示，改良后EE提高30%-50%（图3），尤其在低核酸含量组织（如脾脏）中改善明显。这表明传统方案可能因组织基质差异导致RNA损失。

AAV8样本去污染
MagMAX? mirVana?试剂盒成功清除≥98%质粒DNA和ssDNA（单链DNA）（图4），避免AAV基因组自我扩增引发的假阳性，为基因治疗剂量评估提供可靠基础。

结论与意义
该研究首次提出适用于多组织类型和AAV载体的通用RNA提取改良方案，突破商业试剂盒性能局限。通过标准化氯仿/乙醇步骤，团队实现：

1. 跨平台一致性：适配不同磁珠化学的试剂盒，减少实验室间差异；
2. 下游应用兼容性：高纯度RNA满足RT-qPCR和测序要求；
3. 基因治疗质控：为AAV载体生产建立严格核酸质控标准。

这项工作为分子生物学和制药行业提供了可推广的解决方案，其方法论尤其适用于需要高通量、自动化处理的临床前研究，例如基因药物的PK/PD（药代动力学/药效动力学）分析。未来，该框架可扩展至其他病毒载体或cfRNA（游离RNA）提取场景，推动治疗性核酸产品的标准化进程。