建立黄鳝原始生殖细胞跨目移植技术：解决苗种短缺瓶颈的创新突破

为解决黄鳝(Monopterus albus)苗种依赖野生捕捞的产业瓶颈，研究人员通过荧光标记GFP-nanos3′ UTR mRNA分离黄鳝原始生殖细胞(PGCs)，并利用敲低鲤鱼dnd基因构建无内源生殖细胞的受体，首次实现合鳃目与鲤形目跨目PGC移植。移植12个月后，通过免疫荧光和RT-nested PCR证实黄鳝生殖细胞在鲤鱼性腺中定植存活，为黄鳝代孕繁殖技术奠定基础。

　　

黄鳝作为我国重要的淡水经济鱼类，年产量高达35万吨，但其独特的雌雄同体特性导致雄性成熟个体稀少，雌性怀卵量仅400-800粒，人工繁殖需解剖取精，成本高昂。更严峻的是，养殖所需苗种主要依赖野生捕捞，严重制约产业发展。如何突破苗种短缺瓶颈？中国科学院水生生物研究所的研究团队独辟蹊径，尝试通过跨物种生殖细胞移植技术，让产卵量巨大的鲤鱼为黄鳝"代孕"。这项开创性研究发表在《Water Biology and Security》，首次建立了合鳃目与鲤形目之间的原始生殖细胞(PGCs)移植技术体系。

研究团队采用三大关键技术：首先通过显微注射GFP-nanos3′ UTR mRNA实现黄鳝PGCs特异性荧光标记，并创新性采用剪尾组织消化法结合流式细胞分选获得高纯度PGCs；其次设计靶向鲤鱼dnd基因的翻译阻断型吗啉寡核苷酸(MO)，成功构建无内源生殖细胞的鲤鱼受体；最后建立生殖嵴精确定位移植技术，并通过灵敏度极高的逆转录巢式PCR(RT-nested PCR)和免疫荧光进行长期追踪检测。

在"黄鳝PGCs的标记与分选"部分，研究显示GFP-nanos3′ UTR标记的细胞与Vasa抗体标记的PGCs完全共定位，流式分选后GFP⁺细胞中vasa和nanos3表达量显著高于GFP^-细胞，证实获得高纯度PGCs。"构建无生殖细胞鲤鱼受体"实验发现，dnd MO注射组在16体节期和24 hpf胚胎中Vasa⁺ PGCs数量显著减少，90日龄鲤鱼性腺完全无Vasa⁺细胞，RT-PCR显示vasa和nanos3表达显著下调。"黄鳝生殖细胞在鲤鱼性腺中的定植"结果显示，移植12个月后，9.2%的嵌合鲤鱼性腺中检测到黄鳝特异性dazl基因表达，免疫荧光证实存在Vasa⁺生殖细胞，首次证明跨目移植的PGCs可长期存活。

这项研究突破性地证实，即使在不同目鱼类间，移植的PGCs仍能在受体性腺中定植存活。相较于先前日本鳗鲡PGCs在斑马鱼体内仅存活10天的报道，该研究将异种生殖细胞存活时间延长至12个月，为远缘物种代孕繁殖提供新思路。采用dnd基因敲低构建无菌受体，避免了杂交或三倍体制备的局限性；而创新的剪尾组织消化法，为无转基因鱼品系的PGCs分离提供普适性方案。虽然目前定植效率尚待提高，但该技术体系有望通过优化移植时机、细胞数量等参数，最终实现鲤鱼代产黄鳝配子的目标，从根本上解决苗种短缺问题，对水产种业创新具有里程碑意义。