亚临床登革热二次感染中的适应性免疫特征揭示CD4+ TEMRA细胞与保护性免疫的关联

本研究针对登革热重症防控难题，通过单细胞免疫图谱技术解析了二次感染登革热病毒（DENV）患者的适应性免疫特征。研究发现亚临床感染者具有扩增的CD4+ TEMRA细胞群、高频率DENV特异性CD4+ T细胞及I型干扰素（IFN）基因特征，而住院患者则表现为CD8+ EM细胞功能失调和高增殖性IgG1+浆母细胞扩增。该成果为登革热疫苗研发提供了T细胞定向干预的新靶点，发表于《Cell Host & Microbe》。

　　

登革热作为全球最严重的蚊媒传染病之一，每年导致数亿人感染。尽管多数感染者表现为无症状或轻症，约10%会发展为重症登革热，其出血热和休克综合征致死率高达20%。当前疫苗研发面临核心难题：为何相同病毒在不同个体中会引发截然不同的临床结局？尤其令人困惑的是，二次异型感染者往往出现更严重的症状，这种现象与抗体依赖性增强作用（ADE）和T细胞反应失衡密切相关。

为破解这一免疫学谜题，柬埔寨巴斯德研究所联合法国巴黎巴斯德研究所等机构的研究团队，在《Cell Host & Microbe》发表了突破性研究成果。研究者创新性地通过家庭聚集性调查锁定亚临床感染者，结合单细胞多组学技术，首次系统揭示了保护性免疫与致病性免疫的关键差异特征。

研究采用三大关键技术：1）基于社区监测的纵向队列建立，采集14例二次感染者（6例亚临床/8例住院）急性期样本；2）18色流式细胞术检测T/B细胞亚群频率及功能标记；3）单细胞RNA测序（scRNA-seq）联合TCR/BCR测序解析克隆扩增特征。

亚临床病例的特征性免疫图谱
通过scRNA-seq发现，保护性免疫与CD4⁺终末分化效应记忆T细胞（TEMRA）显著相关，该群体在亚临床组占比提高近2倍（0.62% vs 0.33%）。流式验证显示这些细胞高表达颗粒酶B（Granzyme B），且DENV特异性CD4⁺ T细胞（OX40⁺CD25⁺）频率显著升高（p=0.0244）。TCR分析揭示其携带特定V基因组合（如TRAV12-3/TRBV19），克隆扩增程度远超住院组。

住院患者的免疫失调机制
住院组表现出CD8⁺效应记忆T细胞（EM）的异常活化，虽增殖活跃（MKI67⁺细胞增加4倍）但功能受损：细胞毒性分子颗粒酶K（GzmK）表达降低，抑制性受体PD-1/TIM-3表达升高。单细胞代谢分析显示这些细胞线粒体活性亢进却伴随效应功能缺陷，提示存在"耗竭前体"状态。

B细胞应答的致病作用
住院组浆母细胞扩增达亚临床组的3倍，且呈现IgG1亚型优势（占比>80%）。BCR测序发现其克隆规模与疾病严重度正相关，而亚临床组则以多克隆非转换记忆B细胞为主。差异基因分析显示住院组浆母细胞高表达抗凋亡基因MTRNR2L12，可能与持续性抗体应答相关。

跨组别的核心通路差异
全转录组分析揭示保护性免疫的三大特征：1）Treg功能相关基因（KLRB1、RORA）上调；2）I型干扰素刺激基因（ISG）在CD4⁺亚群广泛激活；3）淋巴细胞迁移调控因子GPR183表达增强。相比之下，住院组呈现TLR信号抑制和STAT1磷酸化障碍，与病毒逃逸机制相符。

这项研究建立了首个登革热保护性免疫的多组学特征谱，证实CD4⁺ TEMRA细胞的细胞毒功能是抵抗重症化的关键屏障。临床转化价值在于：1）为T细胞疫苗设计提供新靶点；2）提出PD-1/TIM-3阻断可能恢复CD8⁺ T细胞功能；3）确立IgG1⁺浆母细胞作为重症预警标志物。该成果不仅解决了登革热免疫保护的世纪争议，更为其他抗体依赖性增强疾病的治疗提供了范式参考。