环状RNA circYAP1通过miR-135b-5p/FRK轴抑制骨肉瘤进展的机制研究

本研究揭示了circYAP1在骨肉瘤中的抑癌作用及其分子机制。研究人员通过临床样本分析发现circYAP1低表达与骨肉瘤转移和不良预后显著相关，进一步实验证实circYAP1通过吸附miR-135b-5p上调FRK表达，从而抑制肿瘤细胞增殖、侵袭和转移。该研究为骨肉瘤诊断和治疗提供了新的潜在靶点，具有重要临床意义。

　　

骨肉瘤(OS)是青少年最常见的原发性恶性骨肿瘤，尽管治疗手段不断进步，但患者5年生存率仍仅有55%-65%，尤其发生肺转移后2年生存率不足25%。这种严峻的临床现状凸显了对骨肉瘤发生发展机制深入研究的紧迫性。近年来，环状RNA(circRNA)作为一类新型非编码RNA，因其独特的共价闭合环状结构和高度稳定性，在肿瘤调控网络中扮演着越来越重要的角色。然而，circYAP1(hsa_circ_0002320)在骨肉瘤中的生物学功能及其作用机制尚不明确。

中国人民解放军联勤保障部队第960医院骨科的研究团队在《iScience》发表了重要研究成果。研究人员首先通过临床样本分析发现circYAP1在骨肉瘤组织中显著低表达，且与肿瘤转移和临床分期密切相关。随后通过体外功能实验证实circYAP1可抑制骨肉瘤细胞增殖、侵袭和迁移能力。机制研究表明，circYAP1作为竞争性内源RNA(ceRNA)吸附miR-135b-5p，从而解除其对FRK的抑制作用，最终发挥抑癌效应。动物实验进一步验证了circYAP1对骨肉瘤生长和肺转移的抑制作用。

研究采用了多种关键技术方法：从86例临床样本中分析circYAP1表达与临床特征的相关性；通过RNase R消化验证circRNA特性；使用荧光原位杂交(FISH)确定circYAP1亚细胞定位；采用RNA pull-down和RNA免疫共沉淀(RIP)验证circYAP1与miR-135b-5p的相互作用；通过双荧光素酶报告基因实验证实miR-135b-5p对FRK 3'UTR的靶向调控；建立原位肺转移模型评估circYAP1的体内抑瘤效果。

CircYAP1低表达预示骨肉瘤高转移状态和不良预后
临床样本分析显示，circYAP1在骨肉瘤组织中的表达量仅为邻近正常组织的47%。值得注意的是，转移性标本中circYAP1表达显著低于非转移性标本。生存分析表明，circYAP1低表达患者总生存期明显缩短。

CircYAP1在骨肉瘤细胞中低表达且主要定位于细胞质
RNase R消化实验证实circYAP1的环状特性，qPCR检测显示其在多种骨肉瘤细胞系中表达显著低于正常成骨细胞hFOB1.19。FISH和亚细胞分离实验共同证实circYAP1主要定位于细胞质，这为其发挥ceRNA功能提供了结构基础。

CircYAP1抑制骨肉瘤细胞增殖、侵袭和迁移
过表达circYAP1显著抑制SOSP-9607和Saos-2细胞的增殖能力，CCK-8和克隆形成实验均证实这一现象。Transwell实验进一步显示，circYAP1可抑制肿瘤细胞的侵袭和迁移能力。

CircYAP1作为miR-135b-5p的海绵发挥作用
生物信息学预测结合实验验证发现，circYAP1与miR-135b-5p存在直接相互作用。RNA pull-down显示circYAP1可特异性富集miR-135b-5p，RIP实验证实两者共同结合于AGO2蛋白。双荧光素酶报告基因实验进一步验证了这种结合的特异性。

CircYAP1通过miR-135b-5p/FRK轴发挥抑癌作用
研究人员发现FRK是miR-135b-5p的直接靶标，其表达受circYAP1/miR-135b-5p轴调控。功能回复实验表明，miR-135b-5p过表达或FRK敲低均可逆转circYAP1的抑癌效应，证实了这一调控轴的重要性。

CircYAP1抑制骨肉瘤体内生长和转移
原位移植瘤模型显示，过表达circYAP1可显著抑制肿瘤体积和重量。活体成像系统检测发现circYAP1组肺转移灶明显减少，病理检查进一步证实了这一点。

这项研究系统阐明了circYAP1在骨肉瘤中的抑癌作用及其分子机制。circYAP1通过吸附miR-135b-5p解除其对FRK的抑制，从而抑制肿瘤恶性生物学行为。这一发现不仅丰富了骨肉瘤ceRNA调控网络的理论基础，更重要的是为临床诊断和治疗提供了新的潜在靶点。circYAP1表达水平可作为骨肉瘤预后评估的分子标志物，而基于circYAP1/miR-135b-5p/FRK轴的靶向干预策略可能成为骨肉瘤治疗的新方向。研究团队特别指出，circRNA的环状结构赋予其高度稳定性，这使得circYAP1有望开发为液体活检标志物，但这一应用潜力尚需进一步临床验证。