Mertk缺陷型C-kit+肝窦内皮细胞对非酒精性脂肪性肝炎的改善作用及机制研究

本研究针对非酒精性脂肪性肝炎（NASH）中肝窦内皮细胞（LSECs）功能紊乱的关键机制，揭示了C-Kit与Gas6-Mertk信号通路的负调控关系。通过体内外实验证实，Mertk缺陷的C-Kit+内皮细胞移植可显著改善LSECs的窗孔化、血管生成及旁分泌功能，从而缓解肝细胞脂质沉积、炎症和纤维化。该研究为NASH治疗提供了新的靶点策略，发表于《BBA-Molecular Basis of Disease》。

　　

非酒精性脂肪性肝炎（NASH）已成为全球肝病负担的重要组成，其病理特征包括肝细胞脂肪变性、炎症和纤维化，但现有治疗手段仍显不足。肝窦内皮细胞（LSECs）作为肝脏微环境的关键调控者，其功能异常与NASH进展密切相关。然而，LSECs亚群异质性及其分子机制尚未明确，尤其是C-Kit⁺亚群与TAM受体酪氨酸激酶家族成员Mertk的交互作用仍属空白。

为解决这一问题，同济大学附属东方医院的研究团队通过单细胞RNA测序（scRNA-seq）发现C-Kit⁺-LSECs在NASH中具有保护作用，并进一步揭示Mertk的异常激活会加剧LSECs功能障碍。研究通过构建MCD饮食诱导的NASH小鼠模型，结合骨髓移植（BMT）技术和体外细胞共培养系统，证实Mertk缺陷的C-Kit⁺内皮细胞可逆转LSECs的毛细血管化、抑制病理性血管生成，并改善肝细胞代谢紊乱。该成果发表于《Biochimica et Biophysica Acta (BBA) - Molecular Basis of Disease》，为靶向LSECs的NASH治疗提供了新思路。

关键技术方法包括：1）从6例NASH患者和MCD饮食小鼠获取样本进行免疫荧光分析；2）通过磁珠分选（MACS）分离C-Kit⁺/C-Kit^-原代LSECs；3）利用shRNA敲低和过表达载体调控Mertk/C-Kit基因；4）扫描电镜（SEM）观察LSECs窗孔结构；5）Transwell和EdU实验检测细胞迁移与增殖；6）建立LSECs与HepG2/LX2细胞共培养体系模拟细胞互作。

研究结果分为六个核心发现：

1. C-Kit负调控Gas6-Mertk信号
   在脂肪变性的LSECs中，C-Kit表达降低而Mertk/p-Mertk显著升高。基因操作证实C-Kit过表达可抑制Mertk磷酸化，反之敲低C-Kit会激活Mertk信号，提示二者存在负反馈调节。

2. Mertk促进LSECs毛细血管化
   SEM显示Mertk敲低使LSECs窗孔密度增加50%，而过表达导致窗孔消失。伴随基底膜成分层粘连蛋白（LN）和玻连蛋白（VN）的沉积减少，证实Mertk通过破坏CAV-1依赖的窗孔结构驱动毛细血管化。

3. Mertk增强血管生成能力
   管形成实验表明，Mertk过表达组血管分支数量增加2.1倍，且促血管生成因子VEGF和Ang1表达上调。BMT实验进一步验证移植Mertk缺陷细胞可降低肝组织VEGF分泌。

4. Mertk调控LSECs增殖与血管舒张
   EdU检测显示Mertk过表达使LSECs增殖率提高80%，同时上调血管舒张介质PGI2和NO。这种异常活化可能加剧NASH相关的血流动力学紊乱。

5. Mertk缺陷LSECs改善肝细胞表型
   共培养实验中，Mertk敲低的LSECs使HepG2细胞脂滴减少40%，并下调脂生成转录因子SREBP-1c，而上调脂肪酸氧化关键分子FXR。

6. 骨髓移植治疗验证
   移植C-Kit⁺-pECs^sh-Mertk的NASH小鼠肝脏纤维化面积减少60%，炎症因子TNF-α水平下降55%，证实靶向干预的有效性。

结论部分强调，本研究首次阐明C-Kit⁺-LSECs通过抑制Mertk信号维持肝窦稳态的分子机制。Mertk的异常激活会诱发"毛细血管化-血管生成-代谢紊乱"恶性循环，而基因干预或细胞移植可打破这一循环。该发现不仅深化了对NASH血管病变的认识，也为开发基于LSECs修饰的细胞疗法提供了理论依据。未来研究可进一步探索Mertk抑制剂与现有抗纤维化药物的协同效应。