Rab27a+CAF外泌体miR-9-5p通过CREBRF/MAPK信号通路促进骨肉瘤进展的机制研究

本研究针对骨肉瘤高复发率和化疗抵抗的临床难题，揭示了癌症相关成纤维细胞（CAF）来源的外泌体miR-9-5p通过靶向抑制CREBRF并激活MAPK信号通路驱动肿瘤恶性进展的新机制。研究人员通过单细胞RNA测序、双荧光素酶报告实验及体内外功能验证，首次鉴定Rab27a+CAF亚群为促癌外泌体的主要来源，为骨肉瘤精准治疗提供了新型生物标志物和靶点。

　　

骨肉瘤作为青少年最常见的原发性恶性骨肿瘤，尽管经过数十年研究，其五年生存率仍停滞在70%左右，化疗抵抗和早期转移成为临床治疗的"阿喀琉斯之踵"。传统观点认为肿瘤细胞自主性驱动恶性进展，但近年研究发现，肿瘤微环境中癌症相关成纤维细胞（CAF）通过分泌外泌体介导的细胞间通讯可能扮演关键角色。然而，CAF亚群的异质性、特定外泌体miRNA的筛选及其下游机制仍是未解之谜。

为解决这一科学问题，河南省肿瘤医院的研究团队开展了一项创新性研究，发现Rab27a⁺CAF亚群分泌的外泌体miR-9-5p可通过CREBRF/MAPK信号轴促进骨肉瘤进展。研究通过60例患者血清和组织样本分析，结合单细胞RNA测序技术，首次绘制了骨肉瘤微环境中CAF亚群的分子图谱。功能实验证实，外泌体miR-9-5p能增强肿瘤细胞增殖、顺铂抵抗并抑制凋亡，而机制研究揭示其通过直接靶向CREBRF（一种新发现的MAPK通路负调控因子）解除对MAPK通路的抑制。该成果发表于《Cellular Signalling》，为理解肿瘤-微环境互作提供了新视角。

关键技术方法包括：从60例骨肉瘤患者队列中分离血清和组织外泌体进行小RNA测序；单细胞RNA测序解析肿瘤微环境异质性；双荧光素酶报告实验验证miR-9-5p与CREBRF的靶向关系；CCK8、Edu和流式细胞术评估细胞功能；皮下移植瘤模型验证体内效应。

【血清外泌体miR-9-5p与骨肉瘤预后相关】
研究发现骨肉瘤患者血清外泌体miR-9-5p表达显著高于健康对照（p<0.01），且高表达组患者无进展生存期缩短35%。透射电镜显示外泌体呈典型杯状形态（50-150nm），Western blot检测到CD63和TSG101阳性标记。

【Rab27a⁺CAF是miR-9-5p主要来源】
单细胞测序揭示肿瘤组织中存在独特的Rab27a⁺CAF亚群，其miR-9-5p表达量是其他CAF亚群的4.2倍。免疫荧光共定位证实Rab27a与CAF标志物α-SMA共表达，且该亚群与外泌体分泌关键通路显著相关。

【miR-9-5p/CREBRF/MAPK调控网络】
双荧光素酶报告实验显示miR-9-5p直接结合CREBRF的3'UTR区（突变后结合活性丧失83%）。功能挽救实验证明，过表达CREBRF可逆转miR-9-5p诱导的MAPK通路激活（p-ERK水平下降62%）和顺铂抵抗（IC50值降低5.7倍）。

【体内实验验证促瘤效应】
小鼠移植瘤模型显示，注射miR-9-5p过表达外泌体的肿瘤体积是对照组的2.3倍（p<0.001），免疫组化显示Ki67阳性率增加且CREBRF表达与MAPK通路活性呈负相关（r=-0.78）。

结论与讨论部分指出，该研究首次阐明Rab27a⁺CAF通过外泌体miR-9-5p-CREBRF-MAPK轴驱动骨肉瘤进展的分子机制。创新性体现在三方面：发现CAF新亚群特异性标记Rab27a；确立CREBRF作为MAPK通路的新型调控因子；提供外泌体miRNA动态监测的临床转化路径。值得注意的是，约27%低CREBRF表达的化疗耐药患者可能从靶向该通路的治疗中获益。未来研究需扩大样本验证miR-9-5p的预测价值，并开发针对该轴的小分子抑制剂或外泌体阻断策略。