基于分子对接和动物实验的Cassytha filiformis促进伤口愈合作用机制研究：聚焦Caspase-3/8靶向调控

本研究针对传统药用植物无根藤(Cassytha filiformis)的伤口愈合机制不明问题，通过体内外实验结合分子对接技术，发现其氯仿提取物通过调控Caspase-3/8（半胱天冬酶）靶点显著促进伤口愈合，5%浓度组在第16天实现100%伤口收缩，分子动力学模拟验证了quercetin 3-O-rutinoside与Caspase-3的稳定结合(ΔGbind=-75.04 kcal/mol)，为开发植物源伤口治疗药物提供了新思路。

　　

在传统医学与现代医疗的交叉领域，伤口愈合始终是困扰临床的难题。世界卫生组织数据显示，手术部位感染率在非洲剖宫产人群中高达20%，而现有治疗手段在资源匮乏地区往往难以普及。这种现实矛盾促使科学家将目光转向传统药用植物——无根藤(Cassytha filiformis)，这种在华南地区被称为"无根藤"的寄生植物，虽在中医典籍中记载具有解毒生肌之效，但其分子机制始终笼罩在神秘面纱之下。

针对这一科学空白，来自中国的研究团队开展了一项整合多学科技术的研究。研究人员首先采用系统溶剂提取法获得石油醚、氯仿等四种极性递进提取物，通过大鼠切除/切口伤口模型发现5%氯仿提取物表现最为突出：不仅使伤口完全收缩时间缩短至16天，其425.5±4.89 g的 tensile strength（抗张强度）甚至超越标准药物framycetin（新霉素B）。在分子层面，研究团队运用GC-MS（气相色谱-质谱联用）鉴定出25种活性成分，并通过柱色谱分离得到关键化合物——伪金丝桃素(pseudohypericin)，其分子式C₃₀H₁₆O₉经核磁共振确认。

研究最精彩的部分在于计算生物学与实验数据的相互印证。AutoDock 4.2分子对接显示，提取物中的槲皮素-3-O-芸香糖苷(quercetin 3-O-rutinoside)与Caspase-3（凋亡执行蛋白）结合能达-11.9 kcal/mol，远超参照药物。通过100 ns分子动力学(MD)模拟，该复合物展现出稳定构象：RMSD（均方根偏差）维持在~2.3 ?，MM/GBSA（分子力学/广义波恩表面积）计算揭示结合主要依赖范德华力(-50.20 kcal/mol)和静电作用(-20.16 kcal/mol)。这些发现为解释传统药效提供了现代科学注脚——植物成分可能通过调控凋亡通路促进组织再生。

技术方法上，研究采用OECD 420指南完成急性毒性试验，确认提取物安全性（LD₅₀>5000 mg/kg）；通过切除/切口双模型评估伤口愈合效果；结合HPTLC（高效薄层色谱）和光谱技术进行成分鉴定；运用AutoDock 4.2和Schr?dinger Suite进行分子对接与动力学模拟；采用MM/GBSA方法计算结合自由能。

研究结果部分：
3.1 提取率
石油醚提取率最高(7.6%)，氯仿与甲醇均为5.8%。

3.3 成分鉴定
从氯仿提取物分离的NC1成分经FTIR和¹³C-NMR确认为伪金丝桃素，其多个酚羟基(3348 cm^-1)可能贡献抗氧化活性。

3.7 伤口愈合
5%氯仿组在第8天即实现74.2%伤口收缩，显著优于对照组(47.1%)；切口模型中的 tensile strength 达425.5±4.89 g，体现卓越的组织修复能力。

3.8 分子对接
60种成分筛选中，槲皮素-3-O-芸香糖苷对Caspase-3/8的 binding score 分别为-11.9/-8.1 kcal/mol，关键氢键涉及ASP B:503(2.04 ?)等残基。

3.9 MD模拟
复合物的Rg（回转半径）稳定在4.8-5.4 ?，PCA（主成分分析）显示主导运动集中于PC1≈20区域，证实构象稳定性。

讨论部分揭示了传统知识与现代科学的完美融合：伪金丝桃素通过抑制蛋白激酶C(IC₅₀15μg/mL)和前列腺素通路发挥抗炎作用，而槲皮素衍生物则可能通过稳定 Caspase 三维结构(α-螺旋占比>90%)调控细胞凋亡。值得注意的是，尽管香港曾报道过无根藤汤剂中毒案例，但本研究证实其提取物在5000 mg/kg剂量下仍显示安全性，这种差异可能源于毒性成分gelsemium alkaloids（钩吻生物碱）在提取过程中的去除。

这项发表在《Pharmacological Research - Modern Chinese Medicine》的研究，不仅为无根藤的临床应用提供了科学依据，更开创性地建立了从传统验方到分子靶点的完整证据链。特别是将MD模拟与传统药理相结合的策略，为其他中药研究提供了可借鉴的范式。未来研究若能聚焦标准化提取工艺和慢性伤口模型，或将加速这一古老植物向现代药物的华丽转身。