高致病性禽流感病毒H5N1亚型2.3.4.4b分支从欧洲灰海豹分离株对雪貂具有高致病性

本研究针对高致病性禽流感病毒(HPAIV)H5N1亚型2.3.4.4b分支在哺乳动物中的致病性展开研究。研究人员通过比较从欧洲灰海豹分离的H5N1 2.3.4.4b病毒与印尼H5N1毒株在雪貂模型中的感染特征，发现新型毒株导致更快速的死亡、严重肺炎及多器官损伤，为评估当前流行毒株的跨种传播风险及干预策略开发提供了关键数据。

　　

禽流感病毒H5N1自1996年在中国广东首次发现以来，已演化出多个分支，其中2.3.4.4b分支近年来在鸟类和哺乳动物中引发空前规模的流行。这种病毒不仅造成大量野生鸟类死亡，还频繁跨种感染哺乳动物，包括海豹、水貂甚至奶牛，引发对人类大流行潜力的担忧。尤其值得注意的是，2023年欧洲灰海豹中发现的H5N1 2.3.4.4b病毒显示出对哺乳动物的适应性增强特征，但其在哺乳动物模型中的致病机制尚不明确。

为解决这一问题，荷兰Cerba Research与德国汉诺威兽医大学等机构的研究团队在《The Journal of Infectious Diseases》发表了重要研究成果。他们系统比较了从灰海豹分离的H5N1 2.3.4.4b病毒(A/grey seal/Netherlands/302603/2023)与早期印尼H5N1毒株(A/Indonesia/05/2005)在雪貂模型中的致病性差异，为评估当前流行毒株的风险提供了关键实验证据。

研究采用的主要技术方法包括：1) 雪貂模型构建：通过皮下植入温度记录仪监测13月龄雌性雪貂的生理参数；2) 病毒接种：采用10^5.0 TCID₅₀剂量经气管接种两种H5N1病毒；3) 多维度检测：包括病毒滴定(TCID₅₀)、RT-qPCR定量病毒RNA、组织病理学(HE染色)和免疫组化(抗流感核蛋白抗体HB65)；4) 全基因组测序分析病毒遗传特征。

临床评估：
灰海豹分离株感染的雪貂出现更快病程进展，50%动物在3天内死亡或达到人道终点，而印尼株感染组全部存活至实验终点。前者还表现出更严重的低体温(<38°C)和呼吸急促，提示更强的系统性疾病。

病毒学分析：
灰海豹病毒在呼吸道复制水平显著更高，肺组织中病毒滴度达6.8 log₁₀ TCID₅₀/g，鼻甲中达5.2 log₁₀ TCID₅₀/g，均显著高于印尼株感染组(P<0.05)。值得注意的是，灰海豹病毒在咽部持续高载量复制，而印尼株几乎未在鼻腔检测到。

病理学特征：
两种毒株均引起严重肺炎(肺相对重量RLW>1.9)，但灰海豹病毒导致更广泛的肺泡损伤和支气管周围浸润。免疫组化显示其病毒抗原在气管上皮、肝细胞和脾脏细胞中的分布更广泛，其中两例死亡动物出现肝脏中度坏死(IHC评分2-3)。

分子特征：
全基因组测序发现灰海豹病毒PB2蛋白339位点的赖氨酸(PB2-339K)可能增强哺乳动物适应性，但未出现E627K等已知哺乳动物适应突变。实验期间病毒基因组保持稳定，未获得新突变。

这项研究首次证实H5N1 2.3.4.4b分支的灰海豹分离株在雪貂模型中表现出比经典印尼株更强的致病性，其快速致死性、多器官播散特征与人类重症H5N1感染病理高度相似。特别值得注意的是，该病毒在缺乏典型哺乳动物适应突变的情况下仍表现出强毒力，提示当前流行株可能已通过其他未知机制获得跨种传播能力。研究建立的雪貂模型为评估抗病毒药物和疫苗对流行株的效果提供了关键平台，对公共卫生防控策略制定具有重要指导意义。作者团队强调，随着H5N1病毒在哺乳动物中持续传播，必须建立基于流行毒株的动物模型来测试新型干预措施。