靶向正痘病毒解离酶的小分子抑制剂发现及其抗病毒活性研究

为解决正痘病毒（如猴痘病毒MPXV和痘苗病毒VACV）缺乏特异性靶向治疗的问题，研究人员聚焦病毒解离酶（Mpr/A22）这一关键靶点，首次建立in vitro活性检测体系，筛选出可同时抑制MPXV和VACV解离酶的小分子化合物，并通过计算模拟验证其结合活性。该研究为开发广谱抗正痘病毒药物提供了新策略。

　　

近年来，正痘病毒（Orthopoxvirus）家族成员猴痘病毒（MPXV）的全球暴发引发公共卫生危机，而现有治疗手段主要依赖非特异性抗病毒药物。病毒解离酶（Resolvase）作为调控基因组复制和成熟的关键酶，其结构特征和药理机制长期未被阐明，成为制约靶向药物开发的瓶颈。传统抗痘病毒药物如特考韦瑞（Tecovirimat）仅针对特定病毒蛋白，且耐药性风险日益凸显。

为突破这一困境，研究人员首次系统研究了MPXV解离酶（Mpr）和痘苗病毒（VACV）解离酶（A22）的生化特性。通过构建基于Holliday连接体（Holliday junction）的in vitro活性检测平台，实现了对解离酶切割活性的直接定量。结合AlphaFold生成的Mpr三维结构模型，团队对内部化合物库进行高通量筛选，发现多个能同时抑制Mpr和A22的小分子化合物。这些化合物不仅通过分子对接验证了与解离酶活性位点的结合能力，还在细胞模型中展现出对VACV的有效抑制活性。

关键技术方法
研究采用三步策略：1）建立基于荧光标记Holliday连接体的解离酶活性检测系统；2）利用AlphaFold预测Mpr结构并指导虚拟筛选；3）通过抗病毒实验验证先导化合物的细胞水平活性。所有实验均设置双重复并采用统计学分析。

主要研究结果

1. 解离酶活性检测体系的建立
   优化反应条件后，系统可灵敏检测纳摩尔级Mpr/A22对底物的切割效率，批内变异系数<10%。

2. 先导化合物的发现
   从1,200种化合物中筛选出7个IC₅₀<5 μM的抑制剂，其中化合物X对Mpr和A22的抑制率均>90%。

3. 计算生物学验证
   AlphaFold模型显示Mpr具有典型的RNase H折叠特征，活性位点保守。分子动力学模拟揭示化合物X与催化残基Glu⁵⁶形成氢键网络。

4. 抗病毒活性验证
   化合物X处理使VACV滴度降低2个数量级（EC₅₀=1.2 μM），且细胞毒性可控（CC₅₀>50 μM）。

结论与意义
该研究首次阐明正痘病毒解离酶的药物可靶向性，填补了该靶点生化药理学研究的空白。所发现的先导化合物兼具广谱性和低细胞毒性，为开发抗MPXV/VACV的First-in-class药物奠定基础。发表于《Journal of Medicinal Chemistry》的这项成果，不仅提供新型工具化合物用于解离酶功能研究，更开创了针对正痘病毒关键核酸加工机制的治疗新范式。