基于RT-PCR/RT-RPA与STH-PAS联用的猫传染性腹膜炎快速诊断系统开发

本研究针对猫传染性腹膜炎（FIP）诊断中传统RT-qPCR技术依赖昂贵设备、需外送检测的局限性，开发了两种基于STH-PAS（单标签杂交印迹阵列条）的快速检测系统：RT-PCR-STH-PAS与RT-RPA-STH-PAS。研究证实两种系统检测限分别达104.2和104 copies/reaction，临床验证灵敏度66.7%、特异性100%，为兽医临床提供了一种便携、高效的即时检测（POCT）方案。

　　

猫传染性腹膜炎（Feline Infectious Peritonitis, FIP）是猫科动物中最致命的疾病之一，由猫冠状病毒（FCoV）突变引发。尽管全球范围内FCoV感染普遍，但仅少数病例会发展为致死性FIP。目前诊断金标准——免疫组化（IHC）和免疫细胞化学（ICC）因需侵入性采样而受限，而广泛使用的RT-qPCR虽灵敏度高，却因依赖昂贵设备难以在基层诊所普及。这一矛盾催生了研究者对便携式诊断技术的迫切需求。

为解决这一难题，国内研究人员开发了两种创新检测系统：一种结合常规逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）与单标签杂交印迹阵列条（STH-PAS），另一种采用等温扩增技术逆转录重组酶聚合酶扩增（RT-RPA）替代RT-PCR。研究团队通过优化3'-UTR靶标引物设计，利用生物素标记和DNA标签杂交原理，使扩增产物在膜条上形成可视条带，实现无需电泳设备的快速判读。临床样本验证采用日本动物医院提供的疑似FIP猫的胸腹水样本，与金标准RT-qPCR进行比对。

病毒培养与样本来源
使用实验室分离的I型FIPV KU-2和荷兰提供的II型FCoV 79-1146毒株，在fcwf-4细胞系中培养。临床样本来自日本多家动物医院提交的疑似FIP病例胸腹水。

RT-PCR-STH-PAS系统优化
针对FCoV 3'-UTR设计带DNA标签的引物，检测限达10^4.2 copies/reaction，较传统方法降低成本且缩短检测时间至2小时内。

RT-RPA-STH-PAS系统开发
利用37-42°C恒温扩增特性，摆脱对热循环仪的依赖，检测限达10⁴ copies/reaction，更适合现场检测。

临床性能评估
在18例RT-qPCR阳性样本中检出12例（灵敏度66.7%），特异性达100%，虽灵敏度有待提升，但为资源有限地区提供了可行替代方案。

讨论与意义
该研究首次将STH-PAS技术引入兽医领域，通过模块化设计实现核酸检测的"设备减负"。RT-RPA-STH-PAS系统尤其适用于缺乏专业实验室的基层诊所，其42°C水浴即可完成扩增的特性，显著降低了FIP诊断门槛。尽管灵敏度低于RT-qPCR，但100%的特异性可有效避免误诊。研究者建议未来通过优化引物设计和扩增条件进一步提升性能，并探索其他体液样本的适用性。这项发表于《Journal of Virological Methods》的成果，为FIP的早期干预提供了技术支撑，推动了兽医POCT技术的发展。