瘤内联合免疫疗法：豇豆花叶病毒与白细胞介素-12协同清除原发肿瘤并激发系统性抗转移免疫反应

为解决实体瘤免疫抑制微环境(TME)和转移灶治疗难题，Dartmouth College团队创新性将豇豆花叶病毒(CPMV)与IL-12电穿孔疗法联用。研究发现IL-12电穿孔后序贯CPMV注射可100%清除原发B16-F10/MC38肿瘤，并显著抑制远端未治疗肿瘤生长，其疗效显著优于单药治疗。该组合策略通过协同激活TLR2/4/7通路与CD8+ T细胞免疫，为临床转化提供新方案。

　　

当前肿瘤免疫治疗面临两大核心挑战：实体瘤的免疫抑制微环境(TME)会阻碍免疫细胞浸润，而转移灶的"免疫豁免"特性更使得系统性治疗收效甚微。虽然瘤内免疫治疗(ITIT)通过局部注射免疫刺激剂可重塑TME，但单一疗法对远端转移灶的控制仍不理想。豇豆花叶病毒(CPMV)作为植物病毒能在哺乳动物中激活TLR2/4/7通路，但其诱导的IL-12分泌不稳定；而IL-12电穿孔疗法虽能激活CD8⁺ T细胞，却缺乏足够的先天免疫激活。Dartmouth College的研究团队通过精巧的实验设计，揭示这两种疗法的时空协同效应可突破当前局限。

研究采用电穿孔技术、ELISA检测、透射电镜(TEM)和双肿瘤模型等关键技术。其中B16-F10黑色素瘤和MC38结直肠癌小鼠模型分别接种于双侧腹股沟，通过对比不同治疗顺序（IL-12电穿孔±CPMV注射）评估疗效。

电穿孔顺序决定CPMV疗效
通过单肿瘤模型发现，CPMV若在电穿孔后注射(EP+CPMV)可保持完整病毒结构，而反向顺序(CPMV+EP)会导致病毒衣壳破坏。TEM显示6次电脉冲(6xEP)使CPMV颗粒聚集解体，凝胶电泳证实其RNA泄漏并被RNase降解。

免疫激活的剂量依赖性
体外脾细胞实验表明，2次电脉冲(2xEP)保留CPMV免疫原性，但4次以上脉冲显著降低IFN-α1/γ、IL-6/12的分泌。这解释了为何临床需采用IL-12电穿孔后序贯CPMV的给药策略。

双肿瘤模型的突破性发现
在B16-F10和MC38模型中，IL-12-EP+CPMV组实现100%原发肿瘤清除，且远端肿瘤抑制效果较单药提升2倍。值得注意的是，CPMV+IL-12-EP组虽也能清除原发灶，但因电穿孔损伤病毒结构，其远隔效应与单药相当，证实完整CPMV颗粒对系统性免疫的必需性。

该研究首次阐明IL-12与CPMV的协同机制：IL-12通过MYD88信号轴激活T细胞，而CPMV提供"危险信号"促进抗原呈递。这种时空精准的组合策略使肿瘤抗原特异性CD8⁺ T细胞扩增效率倍增。研究团队特别指出，FDA已批准的电穿孔设备为临床转化铺平道路，而未来采用脂质纳米粒(LNP)递送IL-12 mRNA或可进一步优化疗效。论文发表于《Molecular Pharmaceutics》，为转移性肿瘤的局部-系统性联合免疫治疗树立了新范式。