FKBP12基因敲除的CD19 CAR-T细胞在免疫抑制环境下实现深度B细胞清除及肿瘤控制

为解决实体器官移植受者因长期免疫抑制导致CAR-T疗法失效的难题，Sana Biotechnology团队通过敲除FKBP12基因构建了具有mTOR抑制剂（Tac/Rapa）抗性的CD19 CAR-T细胞（FKBP-KO），并进一步开发了低免疫原性（HIP）版本。研究表明，HIP-FKBP-KO CAR-T在免疫抑制人源化小鼠模型中可持久清除CD19+ B细胞并控制Nalm6肿瘤，为移植后淋巴增殖性疾病（PTLD）的治疗提供新策略。

　　

实体器官移植受者长期依赖免疫抑制剂（如他克莫司Tac和西罗莫司Rapa）来防止移植物排斥，但这些药物会显著抑制CAR-T细胞的抗肿瘤活性。临床上面临两难困境：降低免疫抑制可能引发移植物排斥，维持抑制则导致CAR-T治疗失败。尤其对于移植后淋巴增殖性疾病（PTLD）患者——其中85%-90%为B细胞来源，现有治疗方案如利妥昔单抗联合化疗存在高复发风险。

为突破这一瓶颈，Sana Biotechnology的研究团队在《Cytotherapy》发表研究，通过基因编辑技术构建了双重优化的CD19 CAR-T细胞：一方面敲除FK结合蛋白12（FKBP-KO）使其耐受mTOR抑制剂，另一方面通过消除HLA I/II类分子并过表达CD47（即HIP设计）降低免疫原性。

研究采用三项关键技术：1）利用CRISPR-Cas9同步敲除T细胞的B2M（β₂-微球蛋白）、CIITA（MHC II类反式激活因子）和FKBP12基因；2）慢病毒载体递送CD19 CAR与CD47共表达系统；3）在Tac/Rapa处理的Nalm6肿瘤人源化NSG-SGM3小鼠模型中评估疗效。

【研究结果】
◆ FKBP-KO维持CAR-T细胞杀伤功能：体外实验显示，常规CAR-T在100 ng/mL Tac或50 nM Rapa环境下完全丧失对良性B细胞和Nalm6肿瘤的杀伤力，而FKBP-KO版本保持>80%的清除效率。
◆ HIP设计避免宿主免疫攻击：HIP-FKBP-KO CAR-T能100%抵抗同种异体T细胞、NK细胞和巨噬细胞的杀伤，而仅敲除FKBP12的WT版本仍被清除。
◆ 体内深度B细胞耗竭：在持续免疫抑制的小鼠中，HIP-FKBP-KO组25天后仍可检测到CAR-T细胞（>10⁴个/μL），并实现骨髓、脾脏等组织的CD19⁺细胞清除；对照组WT-FKBP-KO CAR-T则快速衰减。

【结论与意义】
该研究首次证明：1）FKBP12缺失可使CAR-T抵抗临床剂量mTOR抑制剂；2）HIP改造能同时规避宿主对异体CAR-T的排斥。这种"双保险"设计为移植患者提供了无需调整免疫抑制方案的即用型疗法，尤其适用于EBV相关PTLD和抗体介导的排斥反应（AMR）。作者指出，尽管小鼠样本量较小（n=3-5），但数据高度一致，下一步需在大型动物模型中验证安全性。这项技术突破可能重新定义器官移植受者的癌症治疗范式。