摘要: 在结直肠癌中,肿瘤坏死因子受体相关因子2(tumor necrosis factor receptor-associated factor 2,TRAF2)是Wnt/
β-catenin信号通路的正性调控因子,与结直肠癌发生发展密切相关。本研究旨在通过建立高通量TRAF2亲和力筛选系统,发现新型靶向TRAF2的抗结直肠癌小分子。本研究建立并优化了Dianthus高通量TRAF2筛选系统,大规模筛选中药小分子库中3 716个中药小分子;应用微量热涌动技术(microscale thermophoresis,MST)和活细胞热转移实验(cellular thermal shift assay,CETSA)在纯化蛋白和活细胞中进一步验证结合,其中结合能力最强的异泽兰黄素(eupatilin,EUP)与TRAF2的亲和力为7.87 μmol·L
-1。通过TOPFlash等实验表明,EUP能抑制Wnt/
β-catenin信号通路的活性和结直肠癌细胞及小鼠小肠腺瘤类器官的生长。通过CRISPR/Cas9技术敲除TRAF2后显著减弱了EUP对Wnt信号通路和结肠癌细胞的抑制作用,表明TRAF2是EUP的功能靶标蛋白。综上,本研究构建的Dianthus高通量筛选新方法可以应用于小分子靶向药物的筛选,且通过验证发现EUP是抑制结直肠癌发生发展的TRAF2靶向小分子,为开发靶向TRAF2的抗肿瘤药物提供了理论依据。
