临床与实验室标准研究所M45指南：非铜绿假单胞菌的假单胞菌属抗菌药物敏感性试验方法与折点建立

这篇研究为临床实验室标准研究所（CLSI）M45指南建立了非铜绿假单胞菌假单胞菌属（POPA）的抗菌药物敏感性试验（AST）折点（BPs），填补了现有CLSI非肠杆菌目（nE）折点对POPA适用性不足的空白。通过分析2013-2022年SENTRY数据库的MIC分布数据（包括469株POPA和22,554株铜绿假单胞菌），研究团队提出针对头孢他啶、头孢吡肟、碳青霉烯类等药物的暂定折点，并验证了改良碳青霉烯灭活方法（mCIM）检测碳青霉烯酶的100%敏感性。研究还通过全基因组测序（WGS）揭示了POPA携带金属β-内酰胺酶（MBL）基因的流行情况，为临床精准治疗和耐药防控提供了关键依据。

　　

引言
假单胞菌属（Pseudomonas）作为一类需氧、非发酵葡萄糖的革兰阴性菌，包含250余种已确认的物种，其中12种与人类临床感染密切相关。除铜绿假单胞菌（P. aeruginosa）外，其他假单胞菌属（POPA）多为机会性病原体，常见于免疫功能低下患者的呼吸道感染，尤其是囊性纤维化患者。POPA对氨苄西林、头孢曲松等β-内酰胺类药物天然耐药，且可能通过获得碳青霉烯酶（如MBL）进一步发展为多重耐药表型，成为耐药基因传播的潜在储库。然而，当前CLSI非肠杆菌目（nE）折点对POPA的适用性存疑，且缺乏基于循证医学的标准化药敏试验方法。

材料与方法
研究团队基于2013-2022年SENTRY数据库的469株POPA和22,554株铜绿假单胞菌的MIC数据，通过参考肉汤微量稀释法（BMD）和纸片扩散法（DD）平行试验，建立暂定折点。采用误差界限法（error-rate bounded method）和扩散折点估计软件（dBETS）确定DD与MIC的相关性。同时，通过全基因组测序（WGS）解析耐药基因谱，并评估改良碳青霉烯灭活方法（mCIM）检测碳青霉烯酶的效能。

结果

1. MIC折点：除阿米卡星、氨曲南和复方新诺明外，POPA与铜绿假单胞菌的模态MIC差异≤1倍稀释度。阿米卡星的POPA模态MIC（1 μg/mL）显著低于铜绿假单胞菌（4 μg/mL），故采用肠杆菌目折点。氨曲南和复方新诺明因MIC分布偏高未设折点。
2. 纸片扩散折点：氟喹诺酮类直接沿用铜绿假单胞菌折点，其余药物（如头孢他啶、美罗培南）因原折点中间范围过窄而重新设定。例如，美罗培南DD折点调整为≥18/14–17/≤13 mm。
3. 耐药机制：30株（36.1%）POPA携带β-内酰胺酶基因，其中90.6%为MBL（如bla_POM、bla_VIM-2）。值得注意的是，7株MBL阳性菌对碳青霉烯类仍显示敏感，提示折点需结合表型检测（如mCIM）。

讨论
研究首次系统评估了POPA的药敏折点，其意义在于：

1. 临床实践：为实验室提供标准化AST方法，避免依赖非循证的实验室自建检测。
2. 耐药防控：揭示POPA作为MBL基因储库的风险，强调mCIM在碳青霉烯酶检测中的必要性。
3. 技术挑战：81%临床分离株无法通过常规方法鉴定到种水平，凸显WGS在精准诊断中的价值。

局限性
研究数据主要来自单一数据库，且缺乏PK/PD和临床结局支持。未来需多中心验证以完善折点体系。

结语
CLSI M45委员会提出的暂定折点将于2026年正式发布，为POPA感染的精准治疗和耐药监测奠定基础。实验室可结合本文数据与抗菌药物管理团队讨论早期采纳的可能性。