油莎豆MYB转录因子基因CeMYB154克隆及耐盐功能分析

　　

摘要：

目的 油莎豆MYB转录因子基因CeMYB154参与盐胁迫响应过程，克隆及表征油莎豆CeMYB154并分析其耐盐功能，为油莎豆耐盐育种提供分子基础和基因资源。 方法 基于油莎豆参考基因组信息，克隆CeMYB154的全长CDS序列，利用生物信息学软件对其氨基酸序列特征及其启动子上顺式作用元件进行分析，利用分子生物学技术对其进行亚细胞定位和转录激活验证。构建CeMYB154过表达载体，利用农杆菌介导法转化拟南芥，并对过表达株系的耐盐表型和生理指标进行分析。 结果 成功克隆了长度为780 bp的CeMYB154 CDS序列，其编码蛋白序列中2个典型的MYB结构域，属于R2R3型MYB转录因子。蛋白序列比对分析显示，CeMYB154蛋白在多个物种间序列高度保守。启动子区域含有多种激素（如ABA）响应以及MYB响应相关顺式作用元件。此外，亚细胞定位和转录激活分析显示，CeMYB154是一个具有转录激活活性的核转录因子。成功创制了过表达CeMYB154转基因拟南芥，获得了纯合T₃转基因阳性株系。在盐胁迫下，与野生型拟南芥相比，转基因植株幼苗生长状态（叶片大小、颜色以及根长）较好；并且，转基因植株中MDA和H₂O₂含量均显著降低，而CAT、POD和SOD抗氧化酶活性则显著增强，表明过表达CeMYB154基因提高了拟南芥的耐盐性。 结论 油莎豆CeMYB154具有正向调控盐胁迫响应的功能，过表达CeMYB154基因可以增强抗氧化酶活性而提高转基因植株的耐盐性。