基于灌注技术的小分子添加剂与基因调控协同提升HEK293细胞重组腺相关病毒产量的研究

为解决重组腺相关病毒(rAAV)载体生产瓶颈问题，研究人员通过灌注技术结合小分子添加剂（如抗有丝分裂剂诺考达唑）和基因调控（ZFP91过表达/SFRP5沉默），使HEK293悬浮细胞的rAAV基因组滴度提升1.7-3倍，揭示了G2/M期阻滞延长包装时间的分子机制，为规模化基因治疗载体生产提供新策略。

　　

腺相关病毒(AAV)载体因其低免疫原性和高安全性成为基因治疗明星工具，但产量瓶颈始终制约临床应用。有趣的是，抗有丝分裂小分子诺考达唑(nocodazole)能让HEK293悬浮细胞集体"卡"在G2/M期——就像按下细胞分裂的暂停键。这些细胞虽启动有丝分裂程序，却因无法完成胞质分裂而陷入"进退两难"的境地，最终走向凋亡。看似残酷的"细胞囚禁"策略却意外收获惊喜：处理组粗提基因组滴度较对照组飙升1.7倍！

转录组分析揭开更精妙的分子剧本：锌指蛋白ZFP91如同"细胞周期加速器"，其过表达能模拟诺考达唑效应；而分泌型卷曲相关蛋白SFRP5则扮演"刹车角色"，沉默该基因同样可诱导G2/M期阻滞。这种精准的基因调控使纺锤体形成延迟，相当于为病毒包装争取了宝贵时间，最终实现rAAV产量2-3倍的飞跃。研究团队还捕捉到关键时间窗口——转染后2小时(hpt)添加诺考达唑效果最佳。这项研究为基因治疗载体的工业化生产提供了"细胞工厂"优化新范式，通过化学与遗传手段的"双剑合璧"，突破现有生产技术天花板。