基于PCR技术的白斑病挤压饲料生物安全风险评估方法开发

为解决水产饲料中病原体检测难题，研究人员开发了一种新型一步法常规PCR技术，用于筛查白斑综合征病毒(WSSV)。该研究通过比较WOAH推荐的巢式PCR、实时PCR与新方法在含WSSV虾粉挤压饲料中的检测效果，发现980 bp扩增片段的一步法PCR具有100拷贝检测限，且饲料投喂实验证实病毒无传染性。该成果为水产饲料生物安全评估提供了实用解决方案。

　　

水产配合饲料作为全球养殖业发展的核心驱动力，其生物安全性却因无法区分传染性病原体与灭活基因组片段而面临挑战。针对甲壳类动物永生细胞系缺失的现状，科研团队创新性地建立了一步法常规PCR检测体系。研究以含0.0%、0.2%和2% WSSV感染虾粉的挤压饲料为模型，采用靶向WSSV DNA聚合酶基因的检测方案。

实验数据显示，新开发的实时PCR与WOAH推荐方法均能检出饲料中WSSV DNA。在三种常规PCR引物中，334 bp和341 bp扩增片段成功检出病毒，而980 bp扩增体系与WOAH巢式PCR则未显示阳性信号。值得注意的是，980 bp检测体系展现出100拷贝/μL的检测限，且特异性显著。

关键动物实验表明，投喂WSSV加标饲料的SPF凡纳滨对虾(Penaeus vannamei)经组织病理学和PCR检测均未出现感染症状，证实挤压工艺有效灭活病毒。研究者建议采用高通量实时PCR进行初筛，阳性样本再通过980 bp扩增体系验证，该策略为WSD生物安全评估提供了切实可行的技术路线，直至甲壳类细胞系培养技术取得突破。