基于血清外泌体蛋白质组学分析鉴定强直性脊柱炎新型生物标志物的研究

本研究针对强直性脊柱炎(AS)早期诊断难题，通过分离患者血清来源的细胞外囊泡(EVs)，采用LC-MS/MS蛋白质组学技术鉴定出Fibulin-1(FBLN1)、von Willebrand因子(VWF)、补体H相关蛋白2(CFHR2)和溶菌酶C(LYZ)四种显著上调的蛋白标志物，并经ELISA验证。该发现为AS的无创早期诊断提供了新型分子靶标，对改善疾病管理具有重要意义。

　　

强直性脊柱炎(Ankylosing Spondylitis, AS)是一种以脊柱慢性炎症为主要特征的自身免疫性疾病，患者常因早期症状隐匿而延误诊断，导致不可逆的骨结构损伤。目前临床依赖影像学检查和炎症指标(如CRP、ESR)进行诊断，但缺乏特异性分子标志物。细胞外囊泡(Extracellular Vesicles, EVs)作为携带母细胞特征性分子的"生物快递"，为疾病诊断提供了全新视角。

韩国岭南大学医学院等机构的研究团队创新性地从AS患者血清中分离EVs，通过透射电镜(TEM)和纳米颗粒追踪分析(NTA)确认其形态特征后，采用液相色谱-串联质谱(LC-MS/MS)技术筛选出FBLN1、VWF、CFHR2和LYZ四种差异表达蛋白。这些蛋白在炎症调控、凝血级联和细胞外基质重构等AS关键病理过程中发挥重要作用。研究结果发表于《Clinical and Experimental Medicine》，为AS的早期无创诊断提供了重要理论依据。

关键技术方法包括：1)从20例AS患者和10例对照血清样本中采用ExoQuick^? ULTRA试剂盒分离EVs；2)通过TEM和NTA进行EVs表征；3)基于LC-MS/MS的定量蛋白质组学分析；4)使用ELISA对候选标志物进行独立队列验证。

Isolation of EVs
研究团队首先建立AS患者队列（平均年龄57.7岁，100%男性）和健康对照组，通过差速离心结合ExoQuick^? ULTRA试剂成功分离血清EVs，为后续分析奠定基础。

Characterization of EVs
TEM显示EVs为直径<200 nm的典型杯状结构，NTA检测发现AS组EVs平均粒径(101.7±26.1 nm)显著小于对照组(179.5±25.6 nm)。流式细胞术证实两组EVs均高表达CD9(>90%)、CD63(>95%)和CD81(>91%)等外泌体标志蛋白。

LC-MS/MS analysis
蛋白质组学分析鉴定出1,200余种EVs蛋白，其中FBLN1(2.055倍)、VWF(2.926倍)、CFHR2(3.052倍)和LYZ(3.149倍)在AS组显著上调(p<0.05)。火山图分析直观展示了这些蛋白的差异表达模式。

Validation by ELISA
在扩大样本验证中，VWF表达差异最为显著（AS组11,193±4,781 vs 对照组2,222±2,655 ng/mL），其次是LYZ(86.75±6.88 vs 77.28±4.59 ng/mL)，所有候选蛋白的组间差异均具有统计学意义(p<0.05)。

该研究首次系统揭示了AS患者血清EVs的特异性蛋白谱特征，四种标志物分别涉及补体激活(FCFHR2)、凝血功能(VWF)、细胞外基质重塑(FBLN1)和先天免疫(LYZ)等AS核心病理环节。这些发现不仅为理解AS发病机制提供了新视角，更重要的是建立了基于液体活检的客观诊断体系。相较于传统影像学检查，EVs检测具有取样便捷、可动态监测等优势，对实现AS的早期干预和精准治疗具有重要临床价值。未来研究需在更大队列中验证这些标志物的特异性，并探索其与疾病活动度的相关性。