microRNA-145通过调控细胞周期和凋亡抑制皮肤鳞状细胞癌A431细胞增殖的机制研究

本研究针对皮肤鳞状细胞癌(CSCC)高死亡率及缺乏有效治疗靶点的问题，通过转染miR-145 mimics探讨其对A431细胞增殖、周期和凋亡的影响。结果显示miR-145过表达显著抑制细胞增殖（p<0.01），阻滞细胞周期于G0/G1期，并通过上调Caspase-9/Caspase-3促进凋亡，为CSCC治疗提供了新的分子靶点。

　　

皮肤鳞状细胞癌(CSCC)作为非黑色素瘤皮肤癌的第二大类型，其死亡率在85岁以上人群中高居首位。随着人口老龄化加剧和紫外线暴露增加，CSCC发病率呈持续上升趋势，但现有治疗手段对晚期患者效果有限。更棘手的是，CSCC具有显著的侵袭转移特性，术后复发率高达4%，远高于其他皮肤肿瘤。这种临床困境的背后，是学界对CSCC分子机制认知的不足——尽管已知TP53、CDKN2A等基因突变和异常信号通路参与发病，但关键调控网络仍待揭示。

在这一背景下，遵义医科大学附属医院皮肤科的研究团队将目光投向了microRNA(miRNA)这一基因调控的"微调大师"。特别是miR-145，这个位于人类5号染色体脆弱位点的小RNA分子，已在结直肠癌、前列腺癌等肿瘤中被证实具有抑癌功能，能通过靶向KRAS、MYC等癌基因抑制恶性生物学行为。然而，其在CSCC中的作用仍是未解之谜。发表在《Discover Oncology》的这项研究，首次系统阐明了miR-145通过双重调控细胞周期和凋亡通路抑制CSCC发展的分子机制。

研究采用三大关键技术：1）脂质体介导的miR-145 mimics转染构建功能获得模型；2）CCK-8法动态监测细胞增殖；3）流式细胞术结合Western blot解析周期阻滞与凋亡机制。所有实验均设置空白对照组和阴性对照(miR-NC)组以确保结果可靠性。

相对基因表达(RT-qPCR检测)
通过荧光显微镜确认转染效率>70%后，qPCR显示miR-145 mimics组表达量较对照组显著升高（p<0.01），为后续功能研究奠定基础。

细胞增殖(CCK-8)
转染24/48/72小时后，miR-145组OD₄₅₀值呈时间依赖性下降（p<0.01），证明其持续抑制增殖的特性。

细胞周期分布(流式细胞术)
G0/G1期细胞比例显著增加（p<0.01），S期细胞同步减少，提示miR-145通过周期阻滞发挥抑癌作用。

细胞凋亡率(流式细胞术)
Annexin V/PI双染显示miR-145组凋亡率显著升高（p<0.01），电泳图呈现典型凋亡梯形条带。

相关蛋白表达(Western blot)
Caspase-9(46 kDa)和Caspase-3(32 kDa)表达量显著上调（p<0.01），揭示其通过激活凋亡蛋白酶级联反应促进细胞死亡。

这项研究首次证实miR-145在CSCC中具有三重抑癌功能：抑制增殖、阻滞周期、促进凋亡。其分子机制涉及激活Caspase蛋白酶家族，这为解释CSCC细胞"永生"特性提供了新视角。特别值得注意的是，G0/G1期阻滞现象提示miR-145可能靶向CDK4/6-cyclin D通路，这与既往报道其调控KRAS的效果形成互补。临床转化方面，鉴于miR-145在多种肿瘤中普遍低表达的特点，该研究为开发广谱miRNA替代疗法提供了理论支撑。但需指出，动物实验和临床样本验证的缺失是当前研究的局限，miR-145具体靶基因的筛选也将是未来重点突破方向。

从更广阔的视角看，该研究开创了CSCC表观遗传调控研究的新范式。通过揭示miRNA-mRNA互作网络在CSCC发病中的枢纽地位，不仅为液体活检寻找miR-145等分子标志物指明方向，更启示我们：恢复"沉默"的抑癌miRNA或许能成为对抗皮肤恶性肿瘤的利器。随着纳米递送技术的进步，基于miR-145的基因疗法有望成为CSCC精准医疗的新选择。