肿瘤相关巨噬细胞来源的外泌体circPLK1通过调控miR-186/PI3K/AKT通路促进非小细胞肺癌对奥希替尼的耐药性

本研究针对非小细胞肺癌(NSCLC)患者对第三代EGFR-TKI奥希替尼(OSI)的获得性耐药难题，首次揭示M2型肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)通过外泌体递送环状RNA circPLK1，激活miR-186/PI3K/AKT信号轴，促进EGFR磷酸化并诱导耐药的关键机制。该发现为克服NSCLC靶向治疗耐药提供了新的干预靶点。

　　

肺癌长期占据全球癌症相关死亡的首位，其中非小细胞肺癌(NSCLC)占比高达85%。尽管第三代EGFR酪氨酸激酶抑制剂(TKI)奥希替尼(OSI)显著改善了EGFR突变患者的生存，但治疗19个月后普遍出现的获得性耐药仍是临床面临的严峻挑战。肿瘤微环境(TME)中的M2型肿瘤相关巨噬细胞(TAMs)已被证实通过外泌体介导的细胞间通讯参与耐药形成，但具体分子机制尚未阐明。蚌埠医学院第一附属医院胸外科的研究团队在《Discover Oncology》发表的研究，首次揭示了外泌体circPLK1/miR-186/PI3K/AKT轴在OSI耐药中的关键作用。

研究采用THP-1细胞诱导M2巨噬细胞极化，通过超速离心法分离外泌体，结合CCK-8、流式细胞术和Western blot等技术，系统分析了外泌体circPLK1对NSCLC细胞耐药性、凋亡及EGFR信号通路的影响。通过生物信息学预测和RIP/RNA pull-down实验验证circPLK1与miR-186的相互作用，并利用荧光原位杂交(FISH)追踪外泌体介导的circPLK1转移过程。

2.1 M2极化巨噬细胞诱导NSCLC细胞产生奥希替尼耐药
IL-4/IL-13诱导的M2巨噬细胞高表达CD206和Arg1等标志物。共培养实验显示，M2巨噬细胞使H1975细胞对OSI的IC₅₀值从52.1 nM升至201.9 nM，并显著抑制OSI诱导的细胞凋亡。

2.3 M2外泌体通过激活EGFR促进耐药
透射电镜显示分离的外泌体为80-120 nm的囊泡，Western blot验证CD9/CD63/CD81阳性。M2外泌体(M2-Exo)处理使H1975细胞的OSI IC₅₀进一步升至298.47 nM，伴随EGFR磷酸化(p-EGFR/EGFR)水平显著升高。

2.4 外泌体介导circPLK1的细胞间转移
circPLK1在M2巨噬细胞及其外泌体中表达量较未极化巨噬细胞高3倍。RNase R消化和放线菌素D处理证实circPLK1的稳定性。Cy3标记实验显示外泌体可将circPLK1高效转移至H1975细胞胞质。

2.5 circPLK1过表达直接诱导耐药
过表达circPLK1使H1975细胞OSI IC₅₀升至297.07 nM，抑制细胞凋亡并促进EGFR磷酸化，模拟了M2外泌体的耐药表型。

2.6 circPLK1通过miR-186/PI3K/AKT轴发挥作用
CircInteractome预测和RIP实验证实circPLK1直接结合miR-186。M2外泌体处理使miR-186表达降低60%，同时激活PI3K/AKT和ERK通路关键蛋白(p-AKT/AKT、p-ERK/ERK)及SHP2表达。miR-186模拟物可逆转这些效应，证实该轴的调控作用。

该研究首次阐明M2巨噬细胞通过外泌体circPLK1/miR-186轴激活EGFR-PI3K/AKT信号通路驱动OSI耐药的新机制。不仅为NSCLC靶向治疗耐药提供了新型生物标志物，更提示靶向肿瘤微环境中外泌体介导的细胞间通讯可能成为克服耐药的新策略。研究采用的多种技术方法（如外泌体示踪、circRNA功能验证等）为类似研究提供了范式参考。未来需要进一步探索circPLK1在外泌体中的包装机制及其特异性靶向肿瘤细胞的分子基础，以推动转化应用。