新型慢病毒多表位疫苗在BALB/c小鼠中对利什曼原虫的免疫原性评估及表达研究

本研究针对利什曼病（尤其是由利什曼原虫主要亚种L. major引起的皮肤利什曼病）治疗药物副作用大、缺乏有效疫苗的难题，设计了一种基于KMP11和HASPB抗原表位的重组慢病毒多表位疫苗（rLV-multi-epitope）。通过免疫信息学筛选表位并构建疫苗，研究人员在BALB/c小鼠模型中证实该疫苗能显著提升IFN-γ和IgG2a水平，诱导Th1型免疫应答，为开发无副作用的抗利什曼病疫苗提供了新策略。

　　

利什曼病是全球范围内的重要寄生虫病，其中皮肤利什曼病（Cutaneous Leishmaniasis, CL）在阿富汗、伊朗等98个流行国家威胁着3.5亿人口。现有治疗药物如葡萄糖酸锑钠（Glucantim）和两性霉素B（Amphotericin B）存在成本高、毒性大等问题，而传统疫苗研发因抗原选择、免疫原性不足等挑战屡屡受挫。尤其令人担忧的是，环境变化、军事冲突等因素正加速疾病传播，患者面临皮肤溃疡和社会歧视的双重负担。在这一背景下，法萨医科大学的研究团队另辟蹊径，利用免疫信息学技术筛选关键抗原表位，开发了一种基于慢病毒载体的新型多表位疫苗，相关成果发表于《Tropical Diseases, Travel Medicine and Vaccines》。

研究团队采用免疫信息学方法从L. major的两种抗原——动质体膜蛋白11（Kinetoplastid Membrane Protein 11, KMP11）和亲水性酰化表面蛋白B（Hydrophilic Acylated Surface Protein B, HASPB）中筛选出4个细胞毒性T细胞（CTL）表位和2个辅助性T细胞（HTL）表位，通过GDGDG连接子构建多表位序列。将该序列克隆至pCDH513慢病毒载体后，通过三质粒系统（pCDH、psPAX2、pMD2.G）在HEK293T细胞中包装成重组慢病毒（rLV-multi-epitope）。使用24只BALB/c小鼠分为疫苗组、空载体对照组和PBS对照组，通过皮下注射评估免疫效果。

Western blot验证蛋白表达
免疫印迹分析显示，转导rLV-multi-epitope的HEK293T细胞裂解物中出现10 kDa的目标条带，而空载体组无此条带，证实多表位蛋白成功表达。病毒滴度测定显示重组病毒滴度达1×10⁶ TU/mL。

体液免疫应答增强
ELISA检测显示，疫苗组小鼠血清IgG2a水平（4.35±0.80）较PBS组（0.36±0.05）和空载体组（0.32±0.10）显著升高（p<0.001），IgG1水平（2.50±0.50）也明显高于对照组（p<0.05）。更重要的是，IgG2a/IgG1比值显著增加，提示Th1型免疫占主导地位。

细胞免疫应答激活
用L. major裂解物（SLA）刺激脾细胞后，疫苗组IFN-γ分泌量（1215.75±101.34 pg/mL）远超对照组（p<0.001），IL-4水平（380.12±16.80 pg/mL）虽也有升高，但IFN-γ/IL-4比值显著倾斜，表明疫苗成功诱导了以Th1应答为主的保护性免疫。

这项研究首次证明，基于KMP11-HASPB多表位的慢病毒疫苗能同时激活B细胞和T细胞免疫。其创新性体现在三方面：一是采用GDGDG连接子增强表位间协同作用；二是慢病毒载体既能转导分裂期细胞又能感染静止期细胞，提高了抗原递呈效率；三是多表位设计避免了全蛋白疫苗的过敏风险。与既往研究相比，该疫苗诱导的IFN-γ水平较DNA疫苗提高近7倍，且IgG2a/IgG1比值更优，暗示其可能提供更持久的保护。

尽管仍需开展攻毒实验验证实际保护效果，但该研究为开发安全有效的利什曼病疫苗提供了重要理论依据。未来可进一步优化表位组合，或与TLR激动剂等佐剂联用，有望推动该疫苗进入临床前试验阶段。这项成果不仅对利什曼病防治具有重要意义，其多表位设计策略也可为其他寄生虫疫苗研发提供借鉴。