METTL3通过m6A-YTHDF2依赖性机制调控Ambra1表达促进套细胞淋巴瘤进展的分子机制研究

本研究揭示了METTL3介导的m6A修饰通过YTHDF2依赖性途径下调Ambra1表达，进而促进套细胞淋巴瘤(MCL)恶性进展的分子机制。研究人员通过甲基化RNA免疫共沉淀(MeRIP-qPCR)、基因编辑和裸鼠移植瘤模型等实验，首次证实m6A"读写器"协同调控Ambra1 mRNA稳定性，为MCL靶向治疗提供了新策略。该成果发表于《Journal of Translational Medicine》，具有重要转化医学价值。

　　

套细胞淋巴瘤(MCL)作为B细胞非霍奇金淋巴瘤的侵袭性亚型，约占所有淋巴瘤病例的5-6%，具有临床异质性和预后差的特点。尽管近年来治疗手段有所进步，但复发/难治性患者仍面临治疗困境。既往研究发现自噬/Beclin1调节因子Ambra1在MCL中显著下调，但其调控机制不明。同时，m⁶A作为真核生物中最普遍的mRNA修饰，其异常调控与多种肿瘤进展相关，但在MCL中的作用尚未阐明。这些科学问题促使研究人员探索m⁶A修饰是否参与Ambra1的调控及其在MCL发病中的作用。

中南大学湘雅医院的研究团队通过系统研究，首次揭示METTL3介导的m⁶A修饰通过YTHDF2依赖性途径促进Ambra1 mRNA降解，进而驱动MCL恶性进展的分子机制。该研究不仅阐明了Ambra1表观遗传调控的新机制，还为MCL提供了潜在的治疗靶点。论文发表于《Journal of Translational Medicine》。

研究采用多组学技术策略：通过GEO数据库分析临床样本中Ambra1表达特征；利用MeRIP-qPCR检测m⁶A修饰水平；构建野生型和突变型Ambra1质粒验证METTL3的直接调控；采用CCK-8、EdU掺入和Transwell实验评估细胞表型；通过RIP和RNA pull-down验证YTHDF2与Ambra1的相互作用；最后建立BALB/c裸鼠移植瘤模型验证体内表型。

Ambra1在MCL中下调并与m⁶A修饰相关
分析GSE32018数据集显示MCL患者Ambra1显著低表达。实验证实所有MCL细胞系中Ambra1 mRNA和蛋白水平均低于正常B淋巴细胞(IM-9)。RMBase数据库预测并验证Ambra1 mRNA存在m⁶A修饰位点，且MCL细胞中m⁶A-Ambra1水平显著升高。METTL3表达与Ambra1呈负相关，提示其可能通过m⁶A甲基化调控Ambra1。

METTL3通过m⁶A修饰下调Ambra1表达
RIP实验证实METTL3直接结合Ambra1 mRNA。在Jeko-1和Z138细胞中，METTL3敲除使Ambra1表达升高2.1倍，而过表达则降低60%。突变Ambra1的m⁶A核心位点(如RRACU中的A→C)可消除METTL3的调控作用，证实该过程依赖m⁶A修饰。RNA稳定性实验显示METTL3使Ambra1 mRNA半衰期从8小时缩短至4小时。

METTL3通过Ambra1调控MCL细胞恶性表型
功能实验表明，METTL3敲除使MCL细胞增殖率降低45%，迁移细胞数减少60%，G1期阻滞增加30%，凋亡率升高3.5倍；相反，过表达产生相反效应。这些变化伴随Bcl-2下调、BAX/cleaved caspase-3上调，以及cyclin D1/CDK4/CDK6表达抑制。关键的是，Ambra1过表达可逆转METTL3的促癌作用，而Ambra1敲除则抵消METTL3缺失的抗肿瘤效应。

YTHDF2通过识别m⁶A-Ambra1促进其降解
ENCORI平台预测并经RIP验证YTHDF2与Ambra1 mRNA结合，该结合依赖m⁶A位点。YTHDF2在MCL细胞中高表达且与Ambra1负相关。功能上，YTHDF2敲除使Ambra1 mRNA稳定性延长2倍，而过表达加速其降解。表型上，YTHDF2敲除产生与METTL3敲除类似的抗肿瘤效应，且这些效应可被Ambra1敲除逆转。

METTL3/YTHDF2/Ambra1轴促进MCL体内进展
裸鼠实验显示，METTL3敲除使肿瘤体积缩小65%，重量减轻70%，并上调Ambra1表达；而同时敲除Ambra1可部分恢复肿瘤生长。免疫组化显示METTL3敲除组cyclin D1/CDK4/CDK6表达降低，凋亡标志物增加。

该研究创新性地揭示了METTL3/YTHDF2通过m⁶A依赖性机制调控Ambra1表达的新通路，阐明了其在MCL细胞周期调控和凋亡抵抗中的关键作用。从转化医学角度看，该研究不仅为MCL提供了新的预后标志物(METTL3/YTHDF2)，还提示靶向m⁶A修饰系统(如开发METTL3抑制剂)可能成为MCL治疗的新策略。值得注意的是，Ambra1作为连接表观遗传调控与细胞周期检查点的枢纽分子，其再激活可能克服当前CDK4/6抑制剂的耐药问题，具有重要临床意义。未来研究可进一步探索该通路与肿瘤微环境互作的机制，以及与其他表观调控因子的协同效应。